當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞染色>> 天青石藍(lán)B染色液50ml使用說明書
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天青石藍(lán)B染色液50ml使用說明書使用注意事項(xiàng)
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時(shí)請采取防護(hù)措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時(shí),細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
天青石藍(lán)B染色液50ml使用說明書操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請?jiān)?/span>1 hour內(nèi),進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
天青石藍(lán)B染色液50ml使用說明書實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí),注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時(shí)間不宜過長,否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機(jī)前,補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
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輸尿管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
HDLEC-c adult 人類皮膚淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(HDLEC)來自成年捐獻(xiàn)者 500,000cells 頜下腺上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞;L6
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
T-103AI型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL
TU 686細(xì)胞,人喉癌細(xì)胞 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,ECV-304細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞-二氫*還原酶缺陷型;CHO/dhFr-
C-33 A(人子細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
CNDP1 Others Human 人 CNDP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
LAMP3 Others Cynomolgus 食蟹猴 LAMP3 / DC-LAMP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞HN-h
豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL3
SPC-A1細(xì)胞,人肺腺癌細(xì)胞 綠猴腎細(xì)胞,Vero細(xì)胞 CM-M034小鼠肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
Sf-9(昆蟲細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
NHEK.f-c 正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(NHEK)少年,單一來源 500,000cells 原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml
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