Masson-Fontana黑色素染色試劑盒3×50ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
Masson-Fontana黑色素染色試劑盒3×50ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
Masson-Fontana黑色素染色試劑盒3×50ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
RBL-2H3(大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

恒河猴腎細(xì)胞;LLC-MK2

IFNGR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNGR / IFNGR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

NCI-H838細(xì)胞，人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 大鼠正常肝細(xì)胞,BRL-3A細(xì)胞 CM-R055大鼠卵巢成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

人角膜細(xì)胞HK

Promocell C-28055 M1-Macrophage GenerationMedium DXF, M1-巨噬細(xì)胞生成培養(yǎng)基DXF 250ml
人星形膠質(zhì)細(xì)胞裂解物HAL

HBEGF Others Human 人 HBEGF / DTR 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW620 [SW 620;SW-620]

HCC 94[HCC941122]細(xì)胞，子宮鱗癌細(xì)胞(高分化) 人低分化胃癌細(xì)胞,SGC7901細(xì)胞 豬腎細(xì)胞;PK(15)

tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-2D1

DKK3 Others Mouse 小鼠 Dkk-3 / DKK3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
TCN2 Others Mouse 小鼠 TCN2 / Transcobalamin-II 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人肝星形細(xì)胞RNAHHSteC miRNA5 μg

PA319 人大腸癌細(xì)胞

CL-0466WI38/VA13(SV-40Z轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記)

人淋巴細(xì)胞;1301 人腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
小鼠抵抗素(RETN)ELISA試劑盒 ，英文名： RETN ELISA Kit

人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)ELISA檢測(cè)試劑盒HumancardiacisoformofTropninT,cELISAKit 96T/48T

大鼠*抗*Ⅲ復(fù)合物(TAT-III)免疫試劑盒 Rat thrombin-antithrombin III complex,TAT-III ELISA Kit

英文名稱RatThyroid-PeroxidaseELISAKit大鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

酵母*過氧化物酶(GSHPX)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitCP/CER人銅藍(lán)蛋白規(guī)格：48T/96T
小鼠白介素16(IL-16)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat epithelial neutrophil activating peptide 78 (ENA-78/CXCL5) ELISA Kit 大鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒

Humandeoxypyridinoline,DPDELISAKit 人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancartilageoligomericprotein,COMPELISA試劑盒人軟骨寡聚蛋白(COMP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉(zhuǎn)基因棉花MON1445品系基因檢測(cè)試劑盒20次

HumansmoothmuscleMyosin,SMMELISAKit人平滑肌肌球蛋白(SMM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Masson-Fontana黑色素染色試劑盒3×50ml實(shí)驗(yàn)方法人脫氧膠原交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人脫氫表雄酯(DHEA-S)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝