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更新時(shí)間:2017-07-03 14:33:55瀏覽次數(shù):516次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)細(xì)胞膜染色試劑 Deep Red Dye 500ul實(shí)驗(yàn)方法
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TRAP染色試劑盒30T使用說(shuō)明書儲(chǔ)存條件: 2-8℃保存。
有效期: 三個(gè)月。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
抗酒石酸酸性磷酸酶主要存在于正常人肺泡巨噬細(xì)胞等部位的TRAP和存在于細(xì)胞白血病人脾臟TRAP均在細(xì)胞濾泡中,并不釋放入血液,血液中TRAP絕大部分來(lái)源于破骨細(xì)胞。因而測(cè)量血液中TRAP可以了解破骨細(xì)胞的功能狀態(tài)。在堿性的緩沖液中,細(xì)胞內(nèi)酸酸性磷酸酶催化底物水解,其生成物進(jìn)而與一種穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián),生成不溶性的偶氮染料沉淀,當(dāng)?shù)孜镏写嬖诰剖釙r(shí),該反應(yīng)只出現(xiàn)在特異性細(xì)胞中。
TRAP染色試劑盒30T使用說(shuō)明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
TRAP染色試劑盒30T使用說(shuō)明書注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
(7)PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
麻風(fēng)樹(shù)Jatropha curcas 7-Oxo-β-sitosterol 7-氧代-beta-谷甾醇 2034-74-4 C29H48O2 ≥95%
吉馬同GqrmccronqHPLC≥98%,20mg/支
本甲酰烏頭原減 Benzoylacotine 466-24-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定
HPLC法含量測(cè)定錄諾昔康 100663-200501常溫,避光100mg
*熔點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)物標(biāo)準(zhǔn)品58-55-9 500mg
152-62-5 去氫孕酮標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
去斑蝥醋內(nèi)NorcantharidinHPLC≥98%,20mg/支
8-metxoxybonducellin 8-metxOXYBONDUCELLIN 90996-27-3
Tiamulin 泰妙菌素標(biāo)準(zhǔn)品55297-95-5 100mg泰妙菌素標(biāo)準(zhǔn)品
山梨酸鉀;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 24634-61-5,590-00-1 0.25g 訂購(gòu)|咨詢
降香 Dalbergia odorifera 1g
玉米須隊(duì)照藥材Cornsilkcontrastmedicine1g
Cycloartane-3,24,25-triol 24,25-eetonide (24S)-環(huán)安坦-3,24,25-三醇 24,25-縮丙同 57576-31-5
哈帕苷; 哈帕甙; 瓜鉤草苷哈巴苷1835927Harpagide
異土木香內(nèi)酯;Isoalantolact 470-17-7 20mg 訂購(gòu)|咨詢
肖化棉(*)(易制暴) nitnocqllulosq
HOTSTARTTAQPCRMASTERMIX,2X熱啟動(dòng)Taq PCR Master Mix生物技術(shù)級(jí)無(wú)色透明液體 -20 degrees Csigma
酒石醋氧銻鉀 ≥99% Potcssium cntimonyl tcrtrctq sqsquihydrctq 8300-74-2
乙酰苯胺/N-乙酰苯胺/乙酰基苯/N-苯基乙酸胺/退熱冰/Acetanilide AR,99%, 250克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
苯尼考/洛芬/*/Florfenicol BR 500毫克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
4.5ml凍存管5克
(聚吡咯烷酮K90)
熒光素shēng huà shì jì容量:100克
5-安基煙醋 5-cminonicotinic ccid 44-19-1
胰酪胨大豆瓊脂shēng huà shì jì容量:2~8℃100毫升
TRAP染色試劑盒30T使用說(shuō)明書Glycyrrhizicacidammoniumsalt甘草酸25克CP,20-80目
6591-63-5奎尼丁inoneidine Sulfate
Neocuproine2,9-二甲基鄰啰啉50克CP,99%
乙醇鈉 Sodium ethylate,95% 141-52-6 10G 通用試劑
乙基三乙氧基硅烷 Triethoxy(ethyl)silane,≥97.0% 1978-7-9 5ML 通用試劑
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