當前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞培養(yǎng)>>原代細胞>> T25m2大鼠腦動脈血管平滑肌細胞操作
大鼠腦動脈血管平滑肌細胞【Rat Heart: Normal Aortic Smooth Muscle Cells】 產(chǎn)品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標準。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠腦動脈血管平滑肌細胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963916 |
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Lipase人脂肪酶規(guī)格:48T/96T 硫酸軟骨素 HPLC≥98% 20mg
LMP-1人潛伏膜蛋白1規(guī)格:48T/96T 硫酸小檗堿 HPLC≥98% 20mg
LPL人脂蛋白脂酶規(guī)格:48T/96T 硫辛酸 HPLC≥98% 20mg
Lp-PL-A2人脂蛋脂酶A2規(guī)格:48T/96T 柳穿魚黃素 HPLC≥98% 20mg
LPS人脂多糖/內(nèi)規(guī)格:48T/96T 龍膽苦苷 HPLC≥98% 20mg
Lp-α人脂蛋白α規(guī)格:48T/96T 龍膽山酮酚 HPLC≥98% 10mg
LTA人脂0壁酸規(guī)格:48T/96T 龍膽酸 HPLC≥98% 20mg
LTBP2人組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白2規(guī)格:48T/96T 龍血素A HPLC≥98% 20mg
LXA4人脂氧素A4規(guī)格:48T/96T 龍血素B HPLC≥98% 20mg
MAP-2人微管相關(guān)蛋白2規(guī)格:48T/96T 龍血素C HPLC≥98% 20mg
大鼠粘膠蛋白/肌腱蛋白C(TN-C)試劑盒 Rat Tenascin-C,TN-C ELISA Kit 明膠 Gelatin 質(zhì)量規(guī)格:藥用級,膠強度 ~240 g Bloom
英文名稱HumanCTX-IELISAKit人I型膠原C端肽規(guī)格:96T/48T Bacto酵母浸粉(BD原裝) Yeast extract 質(zhì)量規(guī)格:Bacto;BD212750
動物組織同還原酶1E(aldo-ketoreductase1E)活性比色法定量檢測試劑盒20 無水碳酸鈉 carbonate anhydrous 質(zhì)量規(guī)格:AR,≥99.8%
ELISAKitLebtospira兔鉤端螺旋體IgG規(guī)格:48T/96T D-果糖 D-Fructose 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
小鼠葡萄糖60酸異構(gòu)酶(GPI)ELISA試劑盒 ,英文名: GPI ELISA Kit 核黃素鈉水合物 Riboflavin 5'-monophosphate salt hydrate 質(zhì)量規(guī)格:核黃素73.0 ~79.0%
人合成酶(NOS)ELISA檢測試劑盒Humanniicoxidesyhase,NOSELISAKit 96T/48T 化乙錠溶液,10 mg/ml EB, Ethidium bromide stock solution, 10 mg/ml 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)試劑盒 Rat mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA kit 核苷酸膠體染料 Green-DNA Dye,SYBR Green I 質(zhì)量規(guī)格:BR
英文名稱Humangp130solublefragmeELISAKIT人gp130規(guī)格:96T/48T D-葡萄糖無水 D-Glucose 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,分子生物學(xué)級
動物組織石蠟切片糖蛋白高酸希爾(PAS)法阿爾新藍(ALCIANBLUE)染色試劑盒50 咪唑 Imidazole 質(zhì)量規(guī)格:AR
ELISAKitCA兔兒茶酚胺規(guī)格:48T/96T L(+)-阿拉伯糖 L(+)-Arabinose 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠腦動脈血管平滑肌細胞操作大鼠中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)試劑盒 Rat neuophil elastase,NE ELISA Kit 硫酸氫氯吡格雷 II型(標準品) Clopidogrel Bisulfate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標準品
大鼠中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA檢測試劑盒Ratneuophilgelatinase-associatedlipocalin,NGALELISAKit 96T/48T 硫酸氫氯吡格雷 II型 Clopidogrel Bisulfate 質(zhì)量規(guī)格:含量97.0%-101.5%,II型
大鼠中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)試劑盒 Rat neuophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit 硫酸羥氯喹(標準品) Hydroxychloroquine sulfate 質(zhì)量規(guī)格:UV法溶出度檢查
大鼠中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA檢測試劑盒Ratneuophilactivatingprotein-2,NAP-2ELISAKit 96T/48T 硫酸羥基氯喹 Hydroxychloroquine Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:>98%
大鼠中性粒細胞趨化因子(CINC)試劑盒 Rat cytokine-induced neuophil chemoatacta,CINC ELISA Kit 硫酸鉛(>99%,BC) Lead (II) sulfate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BC
大鼠周期素依賴性激酶5(CDK5)試劑盒 Rat Cyclin Depende Kinase 5,CDK5 ELISA Kit 硫酸普拉鈉(標準品) Dehydroepiandrosterone-3-sulfate 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
大鼠周脂素(Plin1/Peri/Plin)試劑盒 Rat Perilipin-1,Plin1/Peri/Plin ELISA kit 硫酸奈替米星(標準品) Netilmicin Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
大鼠晝夜節(jié)律蛋白同源物2(PER2)試劑盒 Rat Period circadian protein homolog 2,PER2 ELISA kit 硫酸奈替米星 Netilmicin Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:≥595 µg/mg,BR
大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ)ELISA檢測試劑盒RatmajorhistocompatibilitycomplexⅠ,MHCⅠ/AgBⅠ/H-1ⅠELISAKit 96T/48T 硫酸鈉十水(>99%,BC) sulfate, decahydrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BC
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)試劑盒 Rat ansforming growth factor α,TGF-α ELISA Kit 硫酸錳一水(AR) Manganous sulfate monohydrate 質(zhì)量規(guī)格:AR,>99%
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
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