當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞培養(yǎng)>>原代細胞>> T25m2大鼠直腸上皮細胞操作
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠直腸上皮細胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963892 |
大鼠直腸上皮細胞【Rat Rectum:Normal Rectum Mucosa Epithelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。提供的細胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)ELISA試劑盒 ,英文名: α-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit 紫云英苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Astragaline 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA檢測試劑盒Mouseai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgA 96T/48T 棕櫚酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Palmitic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)ELISA檢測試劑盒Mousethyroidstimulatinghormonereceptoraidoby,Ab 96T/48T 王不留行黃酮苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Vaccarin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)ELISA試劑盒 ,英文名: Ab ELISA Kit 絡(luò)塞琳(標(biāo)準(zhǔn)品) Rosarin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠抗單核細胞抗體(AMA)ELISA檢測試劑盒Mouseai-Monocyteaibody,AMA 96T/48T 絡(luò)緦(標(biāo)準(zhǔn)品) Rosin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠抗單核細胞抗體(AMA)ELISA試劑盒 ,英文名: AMA ELISA Kit AT7519.HCl AT7-519.HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98%,多種CDK抑制劑
小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒 ,英文名: ssDNA ELISA Kit 培利替尼;貝利替尼;EKB569 Pelitinib (EKB-569) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,不可逆EGFR抑制劑
小鼠抗核抗體(ANA)ELISA試劑盒 ,英文名: ANA ELISA Kit 雷公藤乙素(標(biāo)準(zhǔn)品) Tripdiolide 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠抗核抗體(ANA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 番瀉苷C(標(biāo)準(zhǔn)品) Sennoside C 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA檢測試劑盒MouseAi-glucoprotein210,GP210 96T/48T 番瀉苷D(標(biāo)準(zhǔn)品) Sennoside D 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠脂酰輔酶A合成酶(ACS)試劑盒 Rat Fatty acyl-CoA syhetase,ACS ELISA Kit 土拉霉素A,托拉菌素A,泰拉霉素 Tulathromycin A 質(zhì)量規(guī)格:>95%
英文名稱HumanS100ELISAKit人S100ELISAKit規(guī)格:96T/48T 土拉霉素A(標(biāo)準(zhǔn)品) Tulathromycin A 質(zhì)量規(guī)格:效價測定
動物組織肌質(zhì)網(wǎng)橫小管(TTube)分離試劑盒10 拉氧頭孢鈉 Latamoxef 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,日本進口分裝
swinemajorhistocompatibilitycomplexⅠ,MHCⅠ/SLAⅠELISA試劑盒豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/SLAⅠ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 原 Procyanidin 質(zhì)量規(guī)格:>95%,葡萄籽提取物
小鼠鞘0脂(SPH)ELISA試劑盒 ,英文名: SPH ELISA Kit 原(標(biāo)準(zhǔn)品) Procyanidin 質(zhì)量規(guī)格:UV>95%,分析標(biāo)準(zhǔn)品
豬腸三葉因子(ITF)ELISA檢測試劑盒PorcineIestinalefoilfactor,ITFELISAKit 96T/48T 胡椒堿 Piperine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,BR
大鼠脂聯(lián)素(ADP)試劑盒 Rat adiponectin,ADP ELISA Kit 胡椒堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Piperine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
英文名稱HumansubstancePreceptorELISAKit人P物質(zhì)受體(SP-R)規(guī)格:96T/48T 紐莫康定B0(肺囊康定) Pneumocandin B0 質(zhì)量規(guī)格:>95%
動物組織肌質(zhì)網(wǎng)三聯(lián)體(IAD)分離試劑盒10 福莫特羅 Formoterol 質(zhì)量規(guī)格:>98%
swinemajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/SLAⅡELISA試劑盒豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/SLAⅡ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 甲后馬托品 Homatropine Methyl Bromide 質(zhì)量規(guī)格:BR,進口原裝
大鼠直腸上皮細胞操作大鼠腺苷受體A2a(ADORA2A)試劑盒 Rat Adenosine receptor A2a,ADORA2A ELISA kit 鋁試劑 Aluminon 質(zhì)量規(guī)格:ACS
大鼠腺苷酸環(huán)化酶1(AC-1)試劑盒 Rat adenylyl cyclase 1,AC-1 ELISA Kit 鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3) Aluminum solution 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3
大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA檢測試劑盒RatpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISAKit 96T/48T 鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體:5%HCl) Aluminum solution 質(zhì)量規(guī)格:100µg/mL,基體:5%HCl
大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)試劑盒 Rat pregnancy associated plasma protein A,PAPP-A ELISA Kit 落葉松樹脂醇 HPLC≥98% 5mg
大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒RatcardiacoponinⅠ,cTn-ⅠELISAKit 96T/48T 落新婦苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Astilbin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒 Rat Cardiac oponin Ⅰ,cTn-Ⅰ ELISA kit 落新婦苷 HPLC≥98% 20mg
大鼠心肌肌鈣蛋白C(TnC)試劑盒 Rat Cardiac oponin C,cTn-C ELISA kit 駱駝蓬堿;駱駝蓬靈;哈梅靈(標(biāo)準(zhǔn)品) Harmaline;Dihydroharmine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)試劑盒 Rat Cardiac oponin T,cTn-T ELISA kit 駱駝蓬堿 HPLC≥98% 5mg
大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(c)試劑盒 Rat cardiac isoform of opnin T,c ELISA Kit 絡(luò)緦(標(biāo)準(zhǔn)品) Rosin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA檢測試劑盒Ratcardioophln1,CT-1ELISAKit 96T/48T 絡(luò)緦 HPLC≥98% 10mg
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