當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2大鼠膀胱成纖維細(xì)胞說明
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
大鼠膀胱成纖維細(xì)胞【Rat Bladder:Normal Bladder Fibroblasts】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠膀胱成纖維細(xì)胞說明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963891 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
OxLDL人氧化低密度脂蛋白規(guī)格:48T/96T 絡(luò)石苷 HPLC≥98% 20mg
OXR人食欲素受體規(guī)格:48T/96T 絡(luò)緦 HPLC≥98% 10mg
p2人神經(jīng)髓鞘蛋白規(guī)格:48T/96T 落新婦苷 HPLC≥98% 20mg
p53兔p53規(guī)格:48T/96T 麻楓樹酚酮B HPLC≥98% 5mg
PAC3人血小板相關(guān)補(bǔ)體3規(guī)格:48T/96T 麻醉椒苫素 HPLC≥98% 10mg
PAF人血小板活化因子規(guī)格:48T/96T 馬兜鈴內(nèi)酰胺 HPLC≥98% 20mg
PAI-1人纖溶酶原激活物抑制因子1規(guī)格:48T/96T 馬兜鈴內(nèi)酰胺A HPLC≥98% 20mg
PA-IgM人血小板相關(guān)抗體IgM規(guī)格:48T/96T 馬兜鈴酸A HPLC≥98% 20mg
PAIg人血小板相關(guān)球蛋白規(guī)格:48T/96T 馬兜鈴酸B HPLC≥98% 20mg
PAI人纖溶酶原激活物抑制因子規(guī)格:48T/96T 馬兜鈴酸C HPLC≥98% 5mg
動物組織活性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10 周效磺胺(標(biāo)準(zhǔn)品) sulphadoxine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Sophorajaponicaagglinin,SJAELISA試劑盒槐凝集素(SJA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 青霉素G鈉鹽 Penicillin G, salt 質(zhì)量規(guī)格:>1500U/mg,USP,BR
小鼠親環(huán)素B(CYPB)ELISA試劑盒 ,英文名: CYPB ELISA Kit 青霉素G鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Penicillin G, salt 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測定
豬白介素1α(IL-1α)ELISA檢測試劑盒PorcineIerleukin1α,IL-1αELISAkit 96T/48T 米格列奈鈣 Mitiglinide calcium Hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
大鼠脂氧素A4(LXA4)試劑盒 Rat Lipoxin A4,LXA4 ELISA Kit 米格列奈鈣(標(biāo)準(zhǔn)品) Mitiglinide calcium Hydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
英文名稱HumanS100BELISAKit人S100B規(guī)格:96T/48T 丙基硫氧嘧啶 /6-正丙基-2-硫代尿嘧啶 Propylthiouracil 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
動物組織肌質(zhì)網(wǎng)粗提分離試劑盒10 氟米龍醋酸酯 Fluorometholone Acetate 質(zhì)量規(guī)格:>97%
Soybeanagglinin,SBAELISA試劑盒大豆凝集素(SBA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 十二苯醚 Pentabromophenyl ether 質(zhì)量規(guī)格:>98%
小鼠親環(huán)素A(CYPA)ELISA試劑盒 ,英文名: CYPA ELISA Kit 氨基雜環(huán)鹽酸鹽 3-Amino-3-azabicyclo[3.3.0]octane 質(zhì)量規(guī)格:>98%
豬β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA檢測試劑盒PorcineIerferonβ,IFN-β/IFNBELISAKit 96T/48T 春雷霉素;春日霉素; 克死霉 Kasugamycin 質(zhì)量規(guī)格:>60%,BR
大鼠膀胱成纖維細(xì)胞說明大鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)試劑盒 Rat Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit 氯吡格雷 Clopidogrel 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
大鼠纖維蛋白原(Fb)試劑盒 Rat Fibrinogen,Fb Elisa Kit 氯銨-T三水(>98%,BR) Chloramine T, trihydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠纖維蛋白原α鏈(Fga)試劑盒 Rat fibrinogen alpha chain,Fga ELISA kit 綠原酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Chlorogenic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠纖維蛋白原β鏈(Fgb/Ab1-181/Ab1-216/Ac1-581)試劑盒 Rat fibrinogen beta chain ELISA Kit 綠原酸 HPLC≥98% 20mg
大鼠纖維蛋白原γ鏈(Fgg)試劑盒 Rat fibrinogen gamma chain,Fgg ELISA kit 綠原酸 Chlorogenic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,BR
大鼠?;囸I素(AG)試劑盒 Rat Acylated Ghrelin,AG ELISA Kit 綠麥隆標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%) Chlortoluron solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=4%
大鼠腺病毒(ADV)抗體(IgG)試劑盒 Rat adenovirus(ADV)aibody IgG ELISA kit 綠草定(標(biāo)準(zhǔn)品) Triclopyr 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠腺病毒抗體(FL/K87-Ab)試劑盒 Rat Adenovirus Aibody,FL/K87-Ab ELISA Kit 律草酮 HPLC≥98% 10mg
大鼠腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)試劑盒 Rat ATP-binding Cassette anspoer A1,ABCA1 ELISA Kit 鋁酞菁(>98.0%(T)) Phthalocyanine Chloroaluminum 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)
大鼠腺苷受體A1(ADORA1)試劑盒 Rat Adenosine receptor A1,ADORA1 ELISA kit 鋁試劑,玫紅三羧酸銨 Aluminon 質(zhì)量規(guī)格:AR
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