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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞操作
細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞操作 | T25m2 | CS-963888 |
大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞【Rat Glomerular :Normal Glomerular Endothelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞處理方法:
以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說(shuō)明書(shū)僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo),請(qǐng)及時(shí)電話或郵件聯(lián)系。
一.貼壁細(xì)胞
客戶接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二.懸浮細(xì)胞
1. 接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2 培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進(jìn)行凍存。
RatCyclin-D1ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氯化飛燕草素O蕓香糖苷 HPLC≥95% 20mg
RatCyclin-D2大鼠細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氯化飛燕草素,O二葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg
RatCyclin-D2ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氯化失車菊素,O雙葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg
RatCyclin-D3大鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 二氫葫蘆素B HPLC≥95% 20mg
RatCyclin-D3ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 葫蘆素B OBetaD葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg
RatCyclosporineA,CsA大鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 新苦木素 HPLC≥95% 20mg
RatCyclosporineA,CsAELISA試劑盒大鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T ,二去氫隱丹參酮 HPLC≥95% 20mg
RatCystatinC,Cys-C大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 丹參二醇A HPLC≥95% 20mg
RatCystatinC,Cys-CELISA試劑盒大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 丹參二醇B HPLC≥95% 20mg
RatCytochrome-C,Cyt-C大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 丹參二醇C HPLC≥95% 20mg
動(dòng)物組織鈣ATP酶(Ca++-ATPase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 吡嗪酰胺 Pyrazinamide 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP
SheepIerleukin2,IL-2ELISA試劑盒綿羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 吡嗪酰胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Pyrazinamide 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
小鼠巰基酸硫轉(zhuǎn)移酶(MPST)ELISA試劑盒 ,英文名: MPST ELISA Kit 鹽酸地美環(huán)素;去金霉素 Demeclocycline 質(zhì)量規(guī)格:>900μg/mg,BR
豬血管生成素1(ANG-1)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineAngiopoietin1,ANG-1ELISAKit 96T/48T 鹽酸地美環(huán)素;去金霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Demeclocycline 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠壞死因子(配體)超家族成員14(TNFSF14)試劑盒 Rat tumor necrosis factor(ligand)superfamily, member 14,TNFSF14 ELISA kit 帕羅西汀 N-Methyl Paroxetine 質(zhì)量規(guī)格:>99%
英文名稱HumanAIL(h)ELISAKIT人AIL規(guī)格:96T/48T 硫酸頭孢喹諾 Cefquinome sulfate 質(zhì)量規(guī)格:干品Cefquinome>80%,BR
動(dòng)物組織鈣鎂ATP酶(Ca++/Mg++-ATPase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 頭孢噻呋鈉 Ceftiofur 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
SheepIerleukin6,IL-6ELISA試劑盒綿羊白介素6(IL-6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 頭孢噻呋鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Ceftiofur 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
小鼠氫/離子交換ATP酶β肽(ATP4β)ELISA試劑盒 ,英文名: ATP4β ELISA Kit 5'-三胞苷二鈉鹽(二水) Cytidine-5'-triphosphate(CTP) di salt dihydrate 質(zhì)量規(guī)格:>97%,分子生物學(xué)級(jí)
豬血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcineangiopoietieceptoie2,ANG-R-Tie2ELISAkit 96T/48T 伏格列波糖 Voglibose 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞操作大鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3)試劑盒 Rat iercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISA Kit 氯化飛燕草素O桑布雙糖苷 HPLC≥95% 20mg
大鼠細(xì)胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)試劑盒 Rat Cytokeratin 18-M30,CK 18-M30 ELISA kit 氯化飛燕草素O葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg
大鼠細(xì)胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)試劑盒 Rat cytokeratin 18-M65,CK 18-M65 ELISA kit 氯化飛燕草素O半乳糖苷 HPLC≥95% 20mg
大鼠細(xì)胞膜鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶1(ATP2B1)試劑盒 Rat Plasma membrane calcium-anspoing ATPase 1,ATP2B1 ELISA kit 氯化飛燕草素O阿拉伯糖苷 HPLC≥95% 20mg
大鼠細(xì)胞色素b5 試劑盒 Rat Cytochrome b5 ELISA Kit 氯化飛燕草素,O二葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg
大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA檢測(cè)試劑盒RatCytochrome-C,Cyt-CELISAKit 96T/48T 氯化膽堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Choline chloride 質(zhì)量規(guī)格:TLC法檢查
大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)試劑盒 Rat Cytochrome-C,Cyt-C ELISA Kit 氯化膽堿 Choline chloride 質(zhì)量規(guī)格:>98%,適用于細(xì)胞培養(yǎng)
大鼠細(xì)胞色素C氧化酶(COX)試劑盒 Rat cytochrome C oxidase,COX ELISA Kit 氯化膽(來(lái)自牛脂)(>87.0%(GC)) Cholesteryl Chloride from Beef Fat 質(zhì)量規(guī)格:>87.0%(GC)
大鼠細(xì)胞色素P450 1A1(CYP1A1)試劑盒 Rat Cytochrome P450 1A1,CYP1A1 ELISA Kit 氯化鉍(>98%,BR) Bismuth (III) chloride 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠細(xì)胞色素P450 3A4(CYP3A4)試劑盒 Rat Cytochrome P450 3A4,CYP3A4 ELISA Kit 氯化銨(AR) Ammonium chloride 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,AR
我公司提供原代細(xì)胞、細(xì)胞系、細(xì)胞株和菌種,細(xì)胞庫(kù)管理規(guī)范,提供的細(xì)胞株背景清楚,提供參考文獻(xiàn)和*培養(yǎng)條件。純度可達(dá) 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
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