當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞培養(yǎng)>>原代細胞>> T25m2大鼠支氣管成纖維細胞操作
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠支氣管成纖維細胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963868 |
大鼠支氣管成纖維細胞【Rat Airway: Normal Bronchial Fibroblasts】產(chǎn)品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA檢測試劑盒Humangasin-reliasingpeptide,GRP 96T/48T 甲磺酸達氟沙星 Danofloxacin mesylate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人胃泌素釋放肽前體(ProGRP)ELISA檢測試劑盒Humanpro-gasin-releasingpeptide,ProGRP 96T/48T 甲磺酸達氟沙星(標準品) Danofloxacin mesylate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
人胃泌素細胞抗體(GCA)ELISA檢測試劑盒Humangasincellaibody,GCA 96T/48T 海藻酸鈣 Calcium Alginate 質(zhì)量規(guī)格:AR,99%
人胃粘液素(GM)ELISA檢測試劑盒HumanGasicMucin,GM 96T/48T 美芬諾酮 Mephenoxalone 質(zhì)量規(guī)格:>98%
人烏頭酸酶2(ACO-2)ELISA檢測試劑盒Humanaconitase2,ACO-2 96T/48T 大豆卵磷脂(高) Lecithin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,BR
人烯(ACR)試劑盒 Human acrolein,ACR ELISA kit 蛋黃卵磷脂 Lecithin from egg 質(zhì)量規(guī)格:BR
人細胞相關蛋白A(CagA)ELISA檢測試劑盒HumanCytotoxin-associatedprotein,CagA 96T/48T 維蘭特羅 Vilanterol;GW642444 質(zhì)量規(guī)格:>98%,吸入型長效β2激動劑
人細胞角蛋白18(CK-18)ELISA檢測試劑盒Humancytokeratin18,CK-18 96T/48T PD98059 PD-98059 質(zhì)量規(guī)格:>98%,MEK抑制劑
人細胞角蛋白19(CK-19)ELISA檢測試劑盒Humancytokeratin19,CK-19 96T/48T PLX4720 PLX-4720 質(zhì)量規(guī)格:>98%,B-RafV600E抑制劑
人細胞角蛋白20(CK-20)ELISA檢測試劑盒Humancytokeratin20,CK-20 96T/48T N,N-羰基二咪唑 1,1'-Carbonyldiimidazole 質(zhì)量規(guī)格:>98%
人鈣轉(zhuǎn)運ATP酶2C型成員1(ATP2C1)試劑盒 human ATP2C1 ELISA Kit 2ˊ,7ˊ-二氯熒光素鈉鹽 2',7'-Dichlorofluorescein Salt 質(zhì)量規(guī)格:>98%
Ratiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1ELISAKit大鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 天青I;天青B Azure I 質(zhì)量規(guī)格:BS
CACNA1G基因化程度定量分析試劑盒20 天青II Azure II 質(zhì)量規(guī)格:BS
MouseLeukemiainhibitoryfactor,LIFELISA試劑盒小鼠白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 天青A Azure A chloride 質(zhì)量規(guī)格:BS
小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒 ,英文名: HSP gp96 ELISA Kit 三氯生 Triclosan 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA檢測試劑盒MousePlateletFactor4,PF-4ELISAKit 96T/48T 刃天青/樹脂天青/刃天青鈉 Resazurin 質(zhì)量規(guī)格:BR,美國biofer進分
人鈣粘蛋白相關的神經(jīng)受體1(C-1)試劑盒 Human C-1 ELISA Kit 天青石藍 Celestine blue 質(zhì)量規(guī)格:BS
Ratiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISAKit大鼠細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 天青 B 曙紅 Azure B eosinate 質(zhì)量規(guī)格:sigma分裝
Carnoy固著液50毫升 利馬前列素 Limaprost 質(zhì)量規(guī)格:>99%
MouseLeukoieneB4,LT-B4ELISA試劑盒小鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 天青II曙紅 Azure II eosinate 質(zhì)量規(guī)格:BS
大鼠支氣管成纖維細胞操作大鼠熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒 Rat heat shock protein 70,hSP-70 ELISA Kit 毛蘭素 HPLC≥98% 20mg
大鼠熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA檢測試劑盒Ratheatshockprotein90,hSP-90ELISAKit 96T/48T 毛花苷C TLC≥95% 20mg
大鼠熱休克蛋白90-alpha(Hsp90aa1/Hsp86/Hspca)試劑盒 Rat Heat shock protein HSP 90-alpha,Hsp90aa1/Hsp86/Hspca ELISA kit 毛喉帖 J HPLC≥98% 5mg
大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)試劑盒 Rat Heat Shock Protein glycoprotein 96,HSP gp96 ELISA Kit 毛喉帖 G HPLC≥98% 5mg
大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA檢測試劑盒RatHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit 96T/48T 毛果蕓香堿 HPLC≥98% 20mg
大鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA檢測試劑盒RatHeatShockFactor1,HSF1ELISAKit 96T/48T 毛果香茶菜醛 A HPLC≥98% 5mg
大鼠熱休克因子1(HSF1)試劑盒 Rat Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA Kit 毛鉤藤堿 HPLC≥98% 10mg
大鼠絨毛膜促性腺激素(CG)ELISA檢測試劑盒RatChorionicGonadoophin,CGELISAKit 96T/48T 毛萼乙素 HPLC≥98% 5mg
大鼠絨毛膜促性腺激素(CG)試劑盒 Rat Chorionic Gonadoophin,CG ELISA Kit 毛萼乙素 Eriocalyxin B 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
大鼠絨毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA檢測試劑盒RatChorionicGonadoophinβ,β-CGELISAKit 96T/48T 毛萼晶乙 HPLC≥98% 5mg
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