當前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞培養(yǎng)>>原代細胞>> T25m2大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞操作
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞【Rat Bone: Normal Articular Chondrocytes】產(chǎn)品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標準。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963860 |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
Ratsexhormone-bindingglobulin,SHBG大鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 米諾地爾(硫酸鹽)敏樂啶(標準品) Minoxidil Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
Ratsexhormone-bindingglobulin,SHBGELISA試劑盒大鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 咪唑司汀 Mizolastine 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
RatskeletalmuscleActinin-α,smActinin-α大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 嗎替麥考酚酯/霉酚酸酯 Mycophenolate Mofetil 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細胞培養(yǎng)
RatskeletalmuscleActinin-α,smActinin-αELISA試劑盒大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 嗎替麥考酚酯/霉酚酸酯(標準品) Mycophenolate Mofetil 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
Ratsolubleclusterofdiffereiation14,sCD14大鼠可溶性CD14(sCD14)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 奈拉濱 Nelarabine 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,細胞培養(yǎng)級
Ratsolubleclusterofdiffereiation14,sCD14ELISA試劑盒大鼠可溶性CD14(sCD14)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 醋酸奈西立肽 Nesiritide Acetate 質(zhì)量規(guī)格:>95%
RatSolubleClusterofdiffereiation30ligand,sCD30L大鼠可溶性CD30配體(sCD30L)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硫酸奈替米星 Netilmicin Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:≥595 µg/mg,BR
RatSolubleClusterofdiffereiation30ligand,sCD30LELISA試劑盒大鼠可溶性CD30配體(sCD30L)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硫酸奈替米星(標準品) Netilmicin Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
RatSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40L大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 制霉菌素 Nystatin 質(zhì)量規(guī)格:USP級,4400u/mg
RatSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISA試劑盒大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 奧氮平 Olanzapine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP,BR,可用于細胞培養(yǎng)
小鼠山梨醇脫氫酶(SDH)ELISA試劑盒 ,英文名: SDH ELISA Kit 利福平(標準品) Rifampicin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標準品
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA檢測試劑盒Mousemaixmetalloproteinase13,MMP-13ELISAkit 96T/48T ε-聚賴氨酸 Epsilon Polylysine 質(zhì)量規(guī)格:溶解性數(shù)據(jù)為19.8,分子量小于5000
人甘氨酸試劑盒 Human Glycin ELISA Kit 普羅雌烯 Promestriene 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR
Ratinsulinaoaibodies,IAAELISAKit大鼠胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 波生坦(水合物) Bosentan hydrate 質(zhì)量規(guī)格:≥98.5%(HPLC),BR,一水合物
BrdU標記法組織冰凍切片細胞繁殖NBT顯色檢測試劑盒10/20 波生坦水合(標準品) Bosentan hydrate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
MouseKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISA試劑盒小鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 福沙吡坦二甲葡胺(MK-0517) Fosaprepitant dimeglumine 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%;P/神經(jīng)激肽受體拮抗劑
小鼠沙眼衣原體抗體IgG(CT IgG)ELISA試劑盒 ,英文名: CT IgG ELISA Kit 普拉格雷 Prasugrel 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)ELISA檢測試劑盒Mousemaixmetalloproteinase10,MMP-10ELISAkit 96T/48T 鹽酸可樂定 Clonidine 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,BR
人干細胞因子受體(SCFR)試劑盒 Human Stem Cell Factor Receptor,SCFR ELISA kit 鹽酸可樂定(標準品) Clonidine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品
RatInsulieceptorβ,ISR-βELISAKit大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 2-甲氧基雌二醇(進分) 2-Methoxyestradiol 質(zhì)量規(guī)格:進分,SigmaM6383
大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞操作大鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)試劑盒 Rat Gelsolin ELISA Kit 孟魯司特鈉 Montelukast 質(zhì)量規(guī)格:>98%,EP7.3,BR
大鼠凝血酶抗凝血酶Ⅲ復(fù)合物(TAT-III)試劑盒 Rat thrombin-aithrombin III complex,TAT-III ELISA Kit 孟魯司特醚 Montelukast Ether 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA檢測試劑盒Ratthrombin-aithrombincomplex,TATELISAKit 96T/48T 孟魯司特二環(huán)己基胺鹽 Montelukast Dicyclohexylamine Salt 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)試劑盒 Rat thrombin-aithrombin complex,TAT ELISA Kit 孟魯司特1,2-二醇(非對映) Montelukast 1,2-Diol(Mixture of Diastereomers) 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
大鼠凝血酶受體()ELISA檢測試劑盒Ratthrombieceptor,ELISAKit 96T/48T 孟加拉玫瑰紅,酸性紅94 Rose bengal 質(zhì)量規(guī)格:AR
大鼠凝血酶受體()試劑盒 Rat thrombin receptor, ELISA Kit 蒙脫石(標準品) Montmorillonit 質(zhì)量規(guī)格:鑒別
大鼠凝血酶原片段F1+2(F1+2)試劑盒 Rat prothrombin fragme 1+2,F1+2 ELISA Kit 蒙花苷(標準品) Buddleoside 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
大鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA檢測試劑盒RatcoagulationfactorⅡ,FⅡELISAKit 96T/48T 蒙花苷 HPLC≥97% 20mg
大鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)試劑盒 Rat coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA Kit 鎂試劑II MagnesonII 質(zhì)量規(guī)格:AR
大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA檢測試劑盒RatcoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISAKit 96T/48T 鎂試劑I MagnesonI 質(zhì)量規(guī)格:AR
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