當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2小鼠皮下脂肪細(xì)胞操作
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠皮下脂肪細(xì)胞【Mouse Fat: Normal Subcutaneous Fat Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠皮下脂肪細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963852 |
實(shí)驗要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
大鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA檢測試劑盒Ratbonemorphogeneticproteins,BMPs 96T/48T 枸櫞酸莫沙比利 Mosapride 質(zhì)量規(guī)格:≥98.5%,BR,二水合物
大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA檢測試劑盒RatBonemorphogeneticprotein6,BMP-6 96T/48T 莫索尼定 Moxonidine 質(zhì)量規(guī)格:度>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
大鼠骨粘連蛋白(ON)ELISA檢測試劑盒Ratosteonectin,ON 96T/48T 莫索尼定(標(biāo)準(zhǔn)品) Moxonidine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠固酮(ALD)ELISA檢測試劑盒rataldosterone,ALD 96T/48T 奈帕芬胺 Nepafenac 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
大鼠固酮(ALD)試劑盒 Rat aldosterone,ALD ELISA Kit 奈帕芬胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Nepafenac 質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA檢測試劑盒RatCaspase3,Casp-3 96T/48T 尼卡巴嗪 Nicarbazin 質(zhì)量規(guī)格:>98%
大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA檢測試劑盒RatCaspase-9,Casp-9 96T/48T 鹽酸尼莫司汀 Nimustine HCl(ACNU) 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
大鼠過敏/補(bǔ)體片斷4a(C4a)ELISA檢測試劑盒RatComplemefragme4a,C4a 96T/48T BEZ235 (Dactolisib) NVP-BEZ 235 質(zhì)量規(guī)格:>98%;ATP競爭性PI3K和mTOR抑制劑
大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA檢測試劑盒Ratperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-α 96T/48T 吡嘧司特鉀 Pemirolast potassium 質(zhì)量規(guī)格:>98%
大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA檢測試劑盒RatPeroxisomeProliferator-activatedreceptorγ,PPAR-γ 96T/48T 培哚普利 Perindopril erbumine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,鹽形式
BPE蛋白標(biāo)記試劑盒(不含BPE)3(1毫克/) 更昔洛韋(標(biāo)準(zhǔn)品) Ganciclovir 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98.5%,標(biāo)準(zhǔn)品
MouseIerleukin4,IL-4ELISA試劑盒小鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 5,6-二-1-茚酮 5,6-Dimethoxy-1-indanone 質(zhì)量規(guī)格:>99%
小鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(G2)ELISA試劑盒 ,英文名: G2 ELISA Kit 芍藥苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Paeoniflorin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分析標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(AIL-R4)ELISA檢測試劑盒Mousetumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand4,AILR4ELISAKit 96T/48T 芍藥苷(40%) Paeoniflorin 質(zhì)量規(guī)格:≥40%
人肝X受體β(LXRβ)試劑盒 Human Liver X Receptor β,LXRβ ELISA Kit 芍藥苷(50%) Paeoniflorin 質(zhì)量規(guī)格:≥50%,BR
RatHyaluronicacid,HAELISAKit大鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芍藥苷(90%) Paeoniflorin 質(zhì)量規(guī)格:≥90%
Bradford大量蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒50 芍藥苷(98%) Paeoniflorin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,高含量易分解
MouseIerleukin4,IL-4ELISA試劑盒小鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 5-羥基色氨酸,5-HTP 5-Hydroxytryptophan 質(zhì)量規(guī)格:≥98.0%,BR,L構(gòu)型
小鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(G1)ELISA試劑盒 ,英文名: G1 ELISA Kit 5-羥基色氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品) 5-HTP 質(zhì)量規(guī)格:≥98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品,L構(gòu)型
小鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(AIL-R3)ELISA檢測試劑盒Mousetumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AILR3ELISAKit 96T/48T 卡巴拉汀 Rivastigmine tartrate 質(zhì)量規(guī)格:≥98%
小鼠皮下脂肪細(xì)胞操作大鼠細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)試劑盒 Rat lymphocyte function associated aigen 3,LFA-3 ELISA Kit 莫諾苷 HPLC≥97% 20mg
大鼠細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA檢測試劑盒Ratlymphotactin,Lptn/LTNELISAKit 96T/48T 莫諾苷 Morroniside 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)試劑盒 Rat lymphotactin,Lptn/LTN ELISA Kit 莫諾苯宗 HPLC≥98% 20mg
大鼠流行性出血熱IgG抗體試劑盒 Rat epidemic hemorrhagic fever IgG aibody ELISA kit 莫能菌素鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Monensin salt 質(zhì)量規(guī)格:含量測定,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠流行性乙型腦炎(JE)抗體(IgG)試劑盒 Rat Japanese Encephalitis(JE)Aibody(IgG)ELISA Kit 莫能菌素鈉 Monensin salt 質(zhì)量規(guī)格:>90%,BR
大鼠硫酸類肝素(HS)試劑盒 Rat heparan sulfate,HS ELISA Kit 莫吉司坦(標(biāo)準(zhǔn)品) Moguisteine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)試劑盒 Rat heparan sulfate proteoglycan 2,HSPG2 ELISA kit 莫吉司坦 Moguisteine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)ELISA檢測試劑盒Ratthioredoxieductase,xRELISAKit 96T/48T 明膠 Gelatin 質(zhì)量規(guī)格:藥用級,膠強(qiáng)度 ~240 g Bloom
大鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)試劑盒 Rat thioredoxin reductase,xR ELISA kit 滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%) Cyromazin solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2%
大鼠硫氧化還原蛋白(x)ELISA檢測試劑盒RatThioredoxin,xELISAKit 96T/48T 滅菌唑(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.2%) Triticonazole 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.2%
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),儀表網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。