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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞操作
細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞操作 | T25m2 | CS-963804 |
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞【Mouse Vascular: Normal Vascular Endothelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞處理方法:
以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說(shuō)明書僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo),請(qǐng)及時(shí)電話或郵件聯(lián)系。
一.貼壁細(xì)胞
客戶接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二.懸浮細(xì)胞
1. 接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2 培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進(jìn)行凍存。
FLAG(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 前杯莧甾酮 HPLC≥96% 5mg
FLUORIDE血液抗凝液100毫升 茜素 HPLC≥98% 20mg
Formolsublimate固著液50毫升 羌活醇 HPLC≥98% 20mg
FRUORESCAMINE蛋白質(zhì)濃度熒光定量試劑盒100 強(qiáng)力霉素 HPLC≥98% 20mg
FRUORESCAMINE蛋白質(zhì)濃度熒光定量試劑盒100 羥基紅花黃色素A HPLC≥98% 20mg
FSH-BETA蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25 羥基積雪草苷 HPLC≥98% 20mg
FSH-BETA蛋白共沉淀分析試劑盒5 羥基積雪草酸 HPLC≥98% 20mg
G418溶液10毫克/毫升 羥基酪醇 HPLC≥98% 20mg
Gamborg’sB5基礎(chǔ)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 羥基酪醇醋酸酯 HPLC≥98% 20mg
Gamborg’sB5*培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 羥基檸檬酸 HPLC≥98% 20mg
英文名稱HumanBonemorphogeneticproteieceptor1AELISAKit人骨成型蛋白質(zhì)受體1A(BMPR1A)規(guī)格:96T/48T 胸腺肽alpha 1 Thymosin alpha 1 Acetate 質(zhì)量規(guī)格:BR,進(jìn)分
動(dòng)物細(xì)胞/組織活性線粒體分離試劑盒10/50 替加氟 Tegafur 質(zhì)量規(guī)格:>98%
RatsolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISA試劑盒大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 替加氟(標(biāo)準(zhǔn)品) Tegafur 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定
小鼠髓鞘堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒 ,英文名: MBP ELISA Kit 阿昔莫司,阿西莫司 Acipimox 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseNeuroophin3,-3ELISAkit 96T/48T 阿昔莫司,阿西莫司(標(biāo)準(zhǔn)品) Acipimox 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人谷氨酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)試劑盒 human GAD-Ab-IgM ELISA Kit 阿達(dá)帕林 Adapalene 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%
Ratglialcellline-derivedneuroophicfactor,GDNFELISAKit大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 阿達(dá)帕林(標(biāo)準(zhǔn)品) Adapalene 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
AP標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 阿德福韋 Adefovir 質(zhì)量規(guī)格:>98%
MousehepatitisBviruscoreaibody,HBcAbELISA試劑盒小鼠乙型肝炎核心抗體(HBcAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 阿德福韋(標(biāo)準(zhǔn)品) Adefovir 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒 ,英文名: MBP ELISA Kit 阿爾法骨化醇 alfacalcidol 質(zhì)量規(guī)格:>99%
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞操作冰凍切片組織INSULIN蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 齊墩果酸(高98%) Oleanolic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,BR
冰凍切片組織IP3R受體蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 齊墩果酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Oleanolic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
冰凍切片組織JNK/SAPK蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 齊墩果酸 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織MAPK蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 齊墩果酸 Oleanolic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,BR
冰凍切片組織MYC蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 漆黃素; 紫鉚素 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織NFKAPPABP50蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 漆黃素(標(biāo)準(zhǔn)品) Fisetin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
冰凍切片組織NFKAPPABP65蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 漆黃素 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織P16蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 漆黃素 Fisetin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,BR
冰凍切片組織P21蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 榿木酮 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織P27蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 七葉皂苷鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Aescinate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
我公司提供原代細(xì)胞、細(xì)胞系、細(xì)胞株和菌種,細(xì)胞庫(kù)管理規(guī)范,提供的細(xì)胞株背景清楚,提供參考文獻(xiàn)和*培養(yǎng)條件。純度可達(dá) 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
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