當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞操作
小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞【Mouse Gastric: Normal Gastric Mucosal Epithelial Cells】 產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963800 |
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
RatCytochrome-C,Cyt-CELISA試劑盒大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 丹參酸甲酯 HPLC≥95% 20mg
RatcytochromeP450,CYP450大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羥基,去氫柳杉酚 HPLC≥95% 20mg
RatcytochromeP450,CYP450ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氧巴馬亭 HPLC≥95% 20mg
RatcytochromeP4502E1,CYP2E1大鼠細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 表丹參隱螺內(nèi)酯 HPLC≥95% 20mg
RatcytochromeP4502E1,CYP2E1ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鼠尾草酚酮 HPLC≥95% 20mg
RatCytosolicPhospholipaseA2,cPLA2大鼠胞漿型0脂酶A2(cPLA2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 表丹參螺縮酮內(nèi)脂 HPLC≥95% 20mg
RatCytosolicPhospholipaseA2,cPLA2ELISA試劑盒大鼠胞漿型0脂酶A2(cPLA2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氫丹參酮IIA HPLC≥95% 20mg
RatDCspecificiercellularadhesionmolecule3-grabbingnoniegrin,DC-SIGN/CD209大鼠樹突狀細(xì)胞表面特異性C型凝集素-細(xì)胞間黏附分子3結(jié)合非整合素分子(DC-SIGN/CD209)規(guī)格:96T/48T 鼠尾草酮 HPLC≥95% 20mg
RatDCspecificiercellularadhesionmolecule3-grabbingnoniegrin,DC-SIGN/CD209ELISA試劑盒大鼠樹突狀細(xì)胞表面特異性C型凝集素-細(xì)胞間黏附分子3結(jié)合非整合素分子(DC-SIGN/CD209)規(guī)格:96T/48T 丹參醇A HPLC≥95% 20mg
RatDehydroepiandrosterone,DHEA大鼠脫氫表雄同(DHEA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 表丹參醇 A HPLC≥95% 20mg
RatskeletalmuscleActinin-α,smActinin-αELISA試劑盒大鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 環(huán)吡司胺; 環(huán)吡酮胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Ciclopirox Olamine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠羧賴酸(CML)ELISA試劑盒 ,英文名: CML ELISA Kit 頭孢西丁鈉 Cefoxitin 質(zhì)量規(guī)格:>90.1%,USP
豚鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA檢測試劑盒guineapighepatocytegrowthfactor,HGFELISAKit 96T/48T 頭孢西丁鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Cefoxitin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
牛1試劑盒 Bovine Coisone ELISA Kit 纈沙坦 Valsartan 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP30
英文名稱HumanOsteocalcinELISAKit人骨橋素(Osteocalcin)規(guī)格:96T/48T 纈沙坦(標(biāo)準(zhǔn)品) Valsartan 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
動(dòng)物細(xì)胞/組織胞漿超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)分離試劑盒50 格列吡嗪 Glipizide 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Ratsolubleclusterofdiffereiation14,sCD14ELISA試劑盒大鼠可溶性CD14(sCD14)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 格列吡嗪 (標(biāo)準(zhǔn)品) Glipizide 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠羧化不全骨鈣素(ucOC)ELISA試劑盒 ,英文名: ucOC ELISA Kit 鹽酸多奈哌齊I型 Donepezil HCl 質(zhì)量規(guī)格:含量98.0-102%,I型
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA檢測試劑盒Mousemaixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISAkit 96T/48T 雌酚酮/雌酮 Estrone 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP32
人谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶6抗體(IgM)試劑盒 Human ansglaminase 6 aibody IgM ELISA kit 雌酚酮/雌酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Estrone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞操作冰凍切片組織AIL蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 前胡素 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織AKT蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 前杯莧甾酮 HPLC≥96% 5mg
冰凍切片組織ANDROGEECEPTOR蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 鉛屑(>99%,5N) Lead granules 質(zhì)量規(guī)格:>99%,5N
冰凍切片組織APC蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 鉛試劑 Dithizone 質(zhì)量規(guī)格:AR
冰凍切片組織BAD蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 鉛粉(>99%,BC) Lead powder 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BC
冰凍切片組織BAX蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,,基體:1%HNO3) Lead standard 質(zhì)量規(guī)格:100µg/mL,,基體:1%HNO3
冰凍切片組織BCL2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 千年健醇 A HPLC≥98% 5mg
冰凍切片組織PASE-10蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 千里光非靈 HPLC≥98% 5mg
冰凍切片組織PASE-1蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 千金子甾醇 HPLC≥98% 20mg
冰凍切片組織PASE-2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 千金子素L1(標(biāo)準(zhǔn)品) Euphorbiasteroid 質(zhì)量規(guī)格:供含量測定用
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
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