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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2人卵巢上皮細(xì)胞操作
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒(méi)有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
人卵巢上皮細(xì)胞【Human Ovary : Normal Ovarian Epithelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 人卵巢上皮細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963752 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
小鼠肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)ELISA試劑盒 ,英文名: CK-MM ELISA Kit (S型)人參皂苷Rg3(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rg3 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌肽合酶1(CARNS1)ELISA試劑盒 ,英文名: CARNS1 ELISA Kit 人參皂苷Rh1(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rh1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌微管素相關(guān)蛋白9(MTMR9)ELISA試劑盒 ,英文名: MTMR9 ELISA Kit (S型)人參皂苷Rh2(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rh2 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌細(xì)胞生成素(MYOG)ELISA試劑盒 ,英文名: MYOG ELISA Kit 人參皂苷Rh3(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rh3 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白(DMD)ELISA試劑盒 ,英文名: DMD ELISA Kit 人參皂苷Ro(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Ro 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白關(guān)聯(lián)糖蛋白1(DAG1)ELISA試劑盒 ,英文名: DAG1 ELISA Kit 肉豆蔻木脂素(標(biāo)準(zhǔn)品) Myrislignan 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠肌原纖蛋白1(FBN1)ELISA試劑盒 ,英文名: FBN1 ELISA Kit 肉桂醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Cinnamyl alcohol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠基端前腦素(-ProBNP)ELISA試劑盒 ,英文名: -ProBNP ELISA Kit 肉桂醛(標(biāo)準(zhǔn)品) Cinnamaldehyde 質(zhì)量規(guī)格:GC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠基端前心肽(-ProANP)ELISA試劑盒 ,英文名: -ProANP ELISA Kit 肉桂酸(標(biāo)準(zhǔn)品) trans-Cinnamic acid 質(zhì)量規(guī)格:GC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠基己糖苷酶Aα(HEXα)ELISA試劑盒 ,英文名: HEXα ELISA Kit 瑞香素/祖師麻甲素(標(biāo)準(zhǔn)品) Daphnetin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratβ2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M,β2-GP1IgA/G/MELISA試劑盒大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1IgA/G/M)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 膽紅素(標(biāo)準(zhǔn)品) Bilibubin 質(zhì)量規(guī)格:UV≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠脫氫酶(XDH)ELISA試劑盒 ,英文名: XDH ELISA Kit 膽紅素 Bilibubin 質(zhì)量規(guī)格:≥85%,BR
人肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶(PPI)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanPeptidylprolylcis/ansisomerase,PPIELISAKit 96T/48T 比伐盧定(TFA) Bivalirudin TFA 質(zhì)量規(guī)格:度大于98%
大鼠胃蛋白酶(PG)試劑盒 Rat Pepsin,PG ELISA Kit 比馬前列腺素/貝美前列素 Bimatoprost 質(zhì)量規(guī)格:度> 99%
英文名稱RatCyclinD2ELISAKit大鼠細(xì)胞周期素D2(CyclinD2)規(guī)格:96T/48T 比馬前列腺素/貝美前列素(標(biāo)準(zhǔn)品) Bimatoprost 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
核酸氧化8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)高效液相色譜(HPLC)分析試劑盒20 鹽酸平陽(yáng)霉素 Bleomycin A5 質(zhì)量規(guī)格:BR,>85%(含Cu離子穩(wěn)定劑)
ELISAKitCH50人血清總補(bǔ)體規(guī)格:48T/96T 硫酸博萊霉素/博來(lái)霉素/爭(zhēng)光霉素 Bleomycin sulfate 質(zhì)量規(guī)格:含量1.5~2.0U/mg,BR
小鼠脫氫表雄酮酯(DHEA-S)ELISA試劑盒 ,英文名: DHEA-S ELISA Kit 硼替佐米/保特佐米 Bortezomib 質(zhì)量規(guī)格:含量> 99%
小鼠細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1ELISAKIT 96T/48T 硼替佐米(標(biāo)準(zhǔn)品) Bortezomib 質(zhì)量規(guī)格:>99%,光學(xué)度>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)試劑盒 Human caspase activated deoxyribonuclease,CAD ELISA Kit 博舒替尼 Bosutinib,SKI-606 質(zhì)量規(guī)格:> 99%,(Src/Abl)酪氨酸激酶雙重抑制劑
人卵巢上皮細(xì)胞操作RatMullerianInhibitingSubstance/Ai-Mullerianhormone,MIS/AMHELISA試劑盒大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 日蟾蜍他靈;和蟾毒他靈(標(biāo)準(zhǔn)品) Gamabufotalin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratmuscarinicacetylcholinereceptor,M-AChRELISAKit大鼠受體(M-AChR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 日蟾蜍他靈 HPLC≥98% 10mg
Ratmuscarinicacetylcholinereceptor,M-AChRELISA試劑盒大鼠受體(M-AChR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 日本前胡醇 HPLC≥98% 20mg
Ratmyelinbasicprotein,MBPELISAKit大鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 刃天青/樹(shù)脂天青/刃天青鈉 Resazurin 質(zhì)量規(guī)格:BR,美國(guó)biofer進(jìn)分
Ratmyelinbasicprotein,MBPELISA試劑盒大鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 忍冬苷 HPLC≥98% 10mg
Ratmyeloperoxidase,MPOELISAKit大鼠髓過(guò)氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 壬烷(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物) Nonane 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
Ratmyeloperoxidase,MPOELISA試劑盒大鼠髓過(guò)氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 壬酸甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl Nonanoate 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
Ratmyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAKit大鼠髓過(guò)氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 壬酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC)) Nonoic acid 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC)
Ratmyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISA試劑盒大鼠髓過(guò)氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 壬酸(Standard for GC ,>99%(GC)) Nonoic acid 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC ,>99%(GC)
RatMyoglobin,MYO/MBELISAKit大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 壬基-β-D-葡萄吡喃糖甙(>98%,BC) Nonyl β-D-glucopyranoside 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC
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