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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2人膀胱成纖維細(xì)胞操作
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒(méi)有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
人膀胱成纖維細(xì)胞【Human Bladder:Normal Bladder Fibroblasts】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 人膀胱成纖維細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963740 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
大鼠孕激素/孕酮(PROG)試劑盒 Rat Progesterone,PROG ELISA kit 瓊脂粉 Agar 質(zhì)量規(guī)格:FMB Grade
大鼠孕酮受體(PROGR)試劑盒 Rat Progesterone receptor,PROGR ELISA kit 三氟胸苷;三氟尿苷(TFT) Trifluridine; Trifluorothymidine 質(zhì)量規(guī)格:>98%
大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)試劑盒 Rat apolipoprotein A1,Apo-A1 ELISA Kit 四水合輔羧酶;四水合硫胺焦酯 Cocarboxylase tetrahydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠載脂蛋白A1前體(Pre-Apo-A1)試劑盒 Rat apolipoprotein A1 precursor,Pre-Apo-A1 ELISA kit 甲磺酸加替沙星 Gatifloxacin mesylate 質(zhì)量規(guī)格:BR,加替沙星干品含量>78%
大鼠載脂蛋白A5(apo-A5)試劑盒 Rat Apolipoprotein A5,apo-A5 ELISA Kit 鹽酸哌羅匹隆 Perospirone 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)試劑盒 Rat apolipoprotein B100,Apo-B100 ELISA Kit 替拉扎明 Tirapazamine(SR259075; Win59075; SR4233) 質(zhì)量規(guī)格:>98%
大鼠載脂蛋白B-48(ApoB48)試劑盒 Rat apolipoprotein B-48,ApoB48 ELISA kit 糊精;白糊精 Dextrin 質(zhì)量規(guī)格:BR
大鼠載脂蛋白C-I(APOC1)試劑盒 Rat apolipoprotein C-I,APOC1 ELISA kit 鹽酸芐達(dá)明 Benzidamine HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠載脂蛋白C-II(APOC2)ELISA Rat apolipoprotein C-II,APOC2 ELISA kit 葡聚糖凝膠G-50;交聯(lián)葡聚糖G-50(中顆粒) Sephadex G-50 質(zhì)量規(guī)格:分類范圍3×100000
大鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA檢測(cè)試劑盒RatApolipoproteinE,Apo-E 96T/48T 葡聚糖凝膠G-50;交聯(lián)葡聚糖G-50(粗顆粒) Sephadex G-50 質(zhì)量規(guī)格:分類范圍3×100000
RatplateletaibodiesIgG/M/A,PA-IgG/M/AELISA試劑盒大鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 醉魚草皂甙IV HPLC≥98% 20mg
小鼠網(wǎng)膜素(omein)ELISA試劑盒 ,英文名: omein ELISA Kit 鹽酸普羅托平; 鹽酸藍(lán)堇堿 HPLC≥98% 20mg
小鼠趨化因子(FK)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseFractalkine,FKELISAKit 96T/48T 脫水羊藿素 HPLC≥98% 20mg
人胱抑素SN(CST1)試劑盒 Human Cystatin-SN,CST1 ELISA kit 去氫丹參新酮 HPLC≥98% 20mg
RatEpidermalgrowthfactor,EGFELISAKit大鼠表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 偽石蒜堿 HPLC≥98% 20mg
5-HIAA高效液相色譜電化學(xué)定量檢測(cè)試劑盒20 β常春藤素 HPLC≥98% 20mg
MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISA試劑盒小鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 苯甲酰新烏頭原堿鹽酸鹽 HPLC≥98% 20mg
小鼠網(wǎng)膜素(omein)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 毛萼晶A HPLC≥95% 20mg
Rat caspase 3 (Casp-3) ELISA Kit 大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒 脫氫樅醇 HPLC≥95% 20mg
HumanCCAAT/enhancerbindingproteinepsilon,C/EBPεELISAKit 人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 異牡荊黃素 HPLC≥98% 20mg
人膀胱成纖維細(xì)胞操作RatLeinizingHormone-ReleasingHormone,LHRHELISA試劑盒大鼠黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三尖杉寧堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Cephalomannine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratleoopichormone,LHELISAKit大鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三尖杉寧堿 HPLC≥98% 20mg
Ratleoopichormone,LHELISA試劑盒大鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三尖杉?jí)A(標(biāo)準(zhǔn)品) Cephalotaxlen 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKit大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三尖杉?jí)A HPLC≥98% 20mg
RatLeptieceptor,LR/Ob-RELISA試劑盒大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 基乙酸(>99%,BR) Trimethylacetic acid 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
RatLeptin,LEPELISAKit大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 基-β-環(huán)糊精(>98.0%(HPLC)) Trimethyl-β-cyclodextrin 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
RatLeptin,LEPELISA試劑盒大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 基[3-(三乙氧基硅基)丙基]氯化銨(>98.0%(T)) Trimethyl[3-(triethoxysilyl)propyl]ammonium Chloride 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)
RatLeptinSolubleReceptor,sLRELISAKit大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%) Tricyclazol solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2%
RatLeptinSolubleReceptor,sLRELISA試劑盒大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%) Tricyclazol solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=2%
RatLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit大鼠鉤端螺旋體IgG(LepIgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三環(huán)[6.4.0.02,7]十二烷-1,8:2,7-四羧酸二酐(>98.0%(GC)) Tricyclo[6.4.0.02,7]dodecane-1,8:2,7-tetracarboxylic Dianhydride 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
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