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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞操作
人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞【Human Peritoneal : Normal Peritoneal Capillary Endothelial Cells】 產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963736 |
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1,IGFBP-1 96T/48T 二萘嵌苯(>98.0%(GC)) Perylene 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP1)ELISA試劑盒 ,英文名: IGFBP1 ELISA Kit 苝(升華提)(>99.0%(GC)) Perylene (purified by sublimation) 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒 ,英文名: IGFBP-1 ELISA Kit 1,1,4,4-四苯基-1,3-丁二烯(>99.0%(HPLC)) 1,1,4,4-Tetraphenyl-1,3-butadiene 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(HPLC)
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 三亞苯(>96.0%(GC)) Triphenylene 質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(GC)
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein2,IGFBP-2 96T/48T 內(nèi)消旋-四苯基卟吩(>92.0%(HPLC)) meso-Tetraphenylchlorin 質(zhì)量規(guī)格:>92.0%(HPLC)
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)ELISA試劑盒 ,英文名: IGFBP2 ELISA Kit 四苯基卟吩(不含氯)(>98.0%(HPLC)) Tetraphenylporphyrin (Chlorin free) 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)ELISA試劑盒 ,英文名: IGFBP-2 ELISA Kit 2,4,6-三苯基-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC)) 2,4,6-Triphenyl-1,3,5-triazine 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3 96T/48T 1,3-二苯基-1,3-丙二酮(>98.0%(GC)) 1,3-Diphenyl-1,3-propanedione 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)ELISA試劑盒 ,英文名: IGFBP3 ELISA Kit 2,6-二-3,5-庚二酮(>97.0%(GC)) 2,6-Dimethyl-3,5-heptanedione 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒 ,英文名: IGFBP-3 ELISA Kit 9H,9H-三十氟-8,10-十七烷二酮(>98.0%(GC)) 9H,9H-Triacontafluoro-8,10-heptadecanedione 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
小鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseFMS-liketyrosinekinase3ligand,Flt-3LELISAKit 96T/48T 異地黃苷 HPLC≥95% 20mg
人廣州管園線蟲抗體(IgG)試劑盒 Human ai-angiosongylus caonensis aibody IgG ELISA Kit 野鴉椿素B HPLC≥95% 20mg
RatEotaxin1ELISAKit大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 氧代甘遂,二烯酸 HPLC≥95% 20mg
50倍Dendha核酸雜交封閉溶液100毫升 克羅酰胺 HPLC≥98% 20mg
MouseFibrinogen,FbgELISA試劑盒小鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 野甘草酸 HPLC≥95% 20mg
小鼠微管關(guān)聯(lián)蛋白τ(MAPτ)ELISA試劑盒 ,英文名: MAPτ ELISA Kit N對(duì)香豆酰真蛸胺 HPLC≥95% 20mg
兔載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA檢測(cè)試劑盒RabbitapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 96T/48T N阿魏酰真蛸胺; N 阿魏酰章魚胺 HPLC≥95% 20mg
牛生長(zhǎng)抑素(SS)試劑盒 Bovine Somatostatin,SS ELISA Kit 早熟素Ⅱ HPLC≥95% 20mg
英文名稱HumanFGF9ELISAKit人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9(FGF9)規(guī)格:96T/48T 鴨腳木堿 HPLC≥95% 20mg
調(diào)料乙酸激酶法定量檢測(cè)試劑盒20 烏沙苷元洋地黃苷 HPLC≥95% 20mg
人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞操作RatInhibin,INH-AELISA試劑盒大鼠抑制素A(INH-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三氧化鉬(>98%,BR) Molybdic oxide 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
RatinhibinB,INH-BELISAKit大鼠抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三氧化二銻(>98%,BR) Antimony (III) oxide 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
RatinhibinB,INH-BELISA試劑盒大鼠抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三氧化二鉻(>99%,BR) Chromium (III) oxide 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
RatInhibinbindingprotein,INHBPELISAKit大鼠抑制素結(jié)合蛋白(INHBP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三亞乙基硫代磷酰胺 Triethylenethiophosphoramide 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
RatInhibinbindingprotein,INHBPELISA試劑盒大鼠抑制素結(jié)合蛋白(INHBP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三亞碳酸酯 TMC 質(zhì)量規(guī)格: 度≥99%
RatinhibitorysubunitofNF-κBα,IKBαELISAKit大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三亞苯(>96.0%(GC)) Triphenylene 質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(GC)
RatinhibitorysubunitofNF-κBα,IKBαELISA試劑盒大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三新戊醇 Trisbromoneopentyl Alcohol 質(zhì)量規(guī)格:>97%
RatInsulieceptorβ,ISR-βELISAKit大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三辛胺(離子對(duì)試劑) Trioctylamine 質(zhì)量規(guī)格:離子對(duì)試劑
RatInsulieceptorβ,ISR-βELISA試劑盒大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三萜酸 A HPLC≥98% 5mg
RatInsulin,INSELISAKit大鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 三特丁基膦(1.0 M in ) Tri-tert-butylphosphine 質(zhì)量規(guī)格:1.0 M in
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
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