使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱(chēng)：番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)LAT52基因染料法PCR試劑盒
貨號(hào):CP96887
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
?實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

以下是番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)LAT52基因染料法PCR試劑盒公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：
Guinea pig IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit資源名稱(chēng)科氏葡萄球菌解脲亞種種屬:Staphylococcuscohniisubsp.urealyticus分離基物:人類(lèi)皮膚

Guinea pig IL-2(Interleukin 2) ELISA Kit資源名稱(chēng)頭葡萄球菌解脲亞種種屬:Staphylococcuscapitissubsp.urealyticus分離基物:人體皮膚

Guinea pig IL-4(Interleukin 4) ELISA Kit資源名稱(chēng)木賊鐮孢種屬:Fusariumequiseti分離基物:花菜籽

Guinea pig MCP-1(Monocyte Chemotactic Protein 1) ELISA Kit資源名稱(chēng)Amycolatopsisdecaplanina種屬:Amycolatopsisdecaplanina分離基物:土壤

Guinea pig MMP-8(Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit資源名稱(chēng)Amycolatopsiskeratiniphilasubsp.keratiniphila種屬:Amycolatopsiskeratiniphilasubsp.keratiniphila分離基物:土壤

Guinea pig MYO(Myoglobin) ELISA Kit資源名稱(chēng)棘孢小單胞菌種屬:Micromonosporaechinospora安全等級(jí):1

Guinea pig NGF(Nerve Growth Factor) ELISA Kit資源名稱(chēng)大孢鏈霉菌種屬:Streptomycesmacrosporus安全等級(jí):1

Guinea pig NOS3/eNOS(Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial) ELISA Kit資源名稱(chēng)紫紅鏈霉菌種屬:Streptomycesviolaceoruber分離基物:土壤

Guinea pig OC/BGP(Osteocalcin) ELISA Kit資源名稱(chēng)法國(guó)蜜環(huán)菌種屬:Armillariella│gallica提供形式:斜面培養(yǎng)物

Guinea pig PCSK9(Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9) ELISA Kit資源名稱(chēng)中間普氏菌（不提供）種屬:Prevotellaintermedia分離基物:膿胸

Guinea pig PEDF(Pigment Epithelium Derived Factor) ELISA Kit資源名稱(chēng)綠葉假單胞菌種屬:Pseudomonas│chlororaphis提供形式:凍干物

Guinea pig PIIINP(N-Terminal Procollagen Ⅲ Propeptide) ELISA Kit資源名稱(chēng)紫芝(紫靈芝，中華靈芝)種屬:Ganoderma│sinense提供形式:斜面培養(yǎng)物

Guinea pig PIINP(Procollagen II N-Terminal ProPeptide) ELISA Kit資源名稱(chēng)變色栓菌（云芝）（斜面）種屬:Trametes versicolor提供形式:斜面培養(yǎng)物

Guinea pig RANTES(Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed And Secreted) ELISA Kit資源名稱(chēng)頭狀葡萄球菌頭狀亞種種屬:Staphylococcus│capitis subsp. capitis提供形式:凍干物

Guinea pig TIMP-1(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 1) ELISA Kit資源名稱(chēng)Z小弧菌種屬:Vibrio mimicus提供形式:凍干物

Guinea pig TIMP-2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit資源名稱(chēng)腸沙門(mén)氏菌腸亞種傷寒血清型種屬:Salmonella│enterica subsp. enterica serovar Typhi提供形式:凍干物

Guinea pig TNF-α(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit資源名稱(chēng)鴨沙門(mén)氏菌種屬:Salmonella anatum提供形式:凍干物

Guinea pig TGF-β1(Transforming Growth Factor Beta 1) ELISA Kit資源名稱(chēng)嗜鞣管囊酵母種屬:Pachysolen tannophilus提供形式:凍干物，斜面

Guinea pig VEGF-A(Vascular Endothelial cell Growth Factor A) ELISA Kit資源名稱(chēng)志賀毒性大腸埃希氏菌種屬:Escherichia coli STEC分離基物:腹瀉病例糞便標(biāo)本

Guinea pig IL-8(Interleukin 8) ELISA Kit資源名稱(chēng)總狀橫梗霉種屬:Lichtheimia│ramosa提供形式:斜面培養(yǎng)物
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)LAT52基因染料法PCR試劑盒HP|HP-1|hp2-alpha|HPA1S|binding peptide|BP|haptoglobin alpha(1S)-beta|haptoglobin alpha(2FS)-beta|haptoglobin|alpha polypeptide|haptoglobin|beta polypeptide|HP2AL|PHA2改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(MLST)產(chǎn)品用途：添加萬(wàn)古霉素即為MLST,用于阪崎腸桿菌PCR檢驗(yàn)方法選擇性增菌。(GB、SN、ISO)產(chǎn)品規(guī)格;225ml/X10袋冷藏：2-8℃

IFN-γ|IFNG|IFG|IFI|Type II Interferon哥倫比亞血平板產(chǎn)品用途：哥倫比亞血平板用于一般病原菌的分離培養(yǎng)和溶血性細(xì)菌的鑒別。產(chǎn)品規(guī)格：90mmX20個(gè)冷藏：2-8℃

Immunoglobulin E巧克力平板培養(yǎng)基(普通)產(chǎn)品用途：巧克力平板培養(yǎng)基(普通)用于分離奈瑟氏菌、流感嗜血菌等。產(chǎn)品規(guī)格：90mmX20個(gè)冷藏：2-8℃

IgG(Immunoglobulin G)巧克力平板培養(yǎng)基（單抗）產(chǎn)品用途：添加萬(wàn)古霉素，用于分離奈瑟氏菌、流感嗜血菌等。產(chǎn)品規(guī)格：90mmX20個(gè)冷藏：2-8℃

IL-10|IL10|IL10A|CSIF|TGIF沙氏瓊脂平板產(chǎn)品用途：沙氏瓊脂平板用于真菌的分離培養(yǎng)，還用于一次性使用衛(wèi)生用品真菌菌落總數(shù)檢測(cè)。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：90mmX20個(gè)冷藏：2-8℃

IL-6(Interleukin 6)|IL6|BSF2|HGF|HSF|IFNB2|CDF營(yíng)養(yǎng)肉湯產(chǎn)品用途：營(yíng)養(yǎng)肉湯用于一般細(xì)菌培養(yǎng)、轉(zhuǎn)種、復(fù)壯、增菌等，也可用于消毒效果測(cè)定。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：10mlX20支冷藏：2-8℃

IL-8|IL8|CXCL8|GCP-1|GCP1|LECT|LUCT|LYNAP|MDNCF|MONAP|NAF|NAP-1|NAP1|3-10C|AMCF-I|K60營(yíng)養(yǎng)瓊脂（斜面）用途：營(yíng)養(yǎng)瓊脂（斜面）用于普通菌種的保存。（GB、ISO)產(chǎn)品規(guī)格：20支/盒冷藏：2-8℃

KIM-1|HAVCR1|HAVCR|HAVCR-1|KIM-1|KIM1|TIM|TIM-1|TIM1|TIMD-1|TIMD1雙糖鐵斜面產(chǎn)品用途：雙糖鐵斜面用于鑒別腸道菌發(fā)酵葡萄糖和乳糖，及產(chǎn)生硫化氫的生化反應(yīng)。(GB)產(chǎn)品規(guī)格：20支/盒冷藏：2-8℃