實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Apx基因PCR試劑盒
貨號:CP96883
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。

以下是番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Apx基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Chicken Estrogen ELISA Kit資源名稱光滑假絲酵母種屬:Candida glabrata提供形式:凍干粉

Chicken FT3(Free Triiodothyronine) ELISA Kit資源名稱Solobacteriummoorei種屬:Solobacteriummoorei分離基物:人類糞便，日本

Chicken FT4(Free Thyroxine) ELISA Kit資源名稱斯氏泛菌種屬:Pantoea stewartii subsp. stewartii提供形式:凍干粉

Chicken CCK(Cholecystokinin) ELISA Kit資源名稱產(chǎn)色葡萄球菌種屬:Staphylococcuschromogenes分離基物:豬皮

Chicken OVA(Ovalbumin) ELISA Kit資源名稱吸水鏈霉菌吸水亞種種屬:Streptomyces hygroscopicus subsp. hygroscopicus分離基物:復(fù)活島土壤

Chicken Calprotectin ELISA Kit資源名稱熱紫鏈霉菌安全等級:1模式菌株:no

Chicken IL-12 p70(Interleukin 12 p70) ELISA Kit資源名稱巴氏生孢八疊球菌種屬:Sporosarcina pasteurii安全等級:1

Chicken CCL5(C-C motif chemokine 5) ELISA Kit資源名稱大腸桿菌BS-3234種屬:E. coli S17-1 lpir Stab模式菌株:未知

Chicken GPX1(Glutathione peroxidase) ELISA Kit資源名稱膿腫分枝桿菌種屬:Mycobacterium abscessus提供形式:凍干物

Chicken T3(Triiodothyronine) ELISA Kit資源名稱弗勞地檸檬酸桿菌種屬:Citrobacter freundii提供形式:凍干物

Chicken P8(caspase 8) ELISA Kit資源名稱普通擬桿菌種屬:Bacteroides│vulgatus提供形式:凍干物

Chicken SOD1(Superoxide dismutase [Cu-Zn]) ELISA Kit資源名稱嗜熱棲熱菌種屬:Thermus│thermophilus分離基物:熱溫泉

Chicken DHT(Dihydrotestosterone) ELISA Kit資源名稱高加索酸奶乳桿菌種屬:Lactobacillus kefiri分離基物:口服液

Chicken OCLN(Occludin) ELISA Kit資源名稱水生異常球菌種屬:Deinococcus│aquaticus分離基物:環(huán)境污水

Chicken IL-1A(Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit資源名稱毛霉屬（斜面）種屬:Mucor sp.分離基物:白酒糟

Chicken PRL(Prolactin) ELISA Kit資源名稱殺鮭氣單胞菌種屬:Aeromonas salmonicida分離基物:化工污水

Chicken GH(Growth Hormone) ELISA Kit資源名稱梭形芽孢桿菌種屬:Bacillus fusiformis提供形式:凍干物

Camel IFN-γ(Interferon Gamma) ELISA Kit資源名稱致瀉大腸埃希氏菌種屬:Escherichia coli EPEC O 127 : K63提供形式:凍干物

Camel IL-10(Interleukin 10) ELISA Kit資源名稱微桿菌屬種屬:Microbacterium sp.形態(tài)菌落形態(tài)：菌落淺黃色，圓形，表面光滑、濕潤、稍凸，不透明。

Camel PGC(Pepsinogen) ELISA Kit資源名稱暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌（斜面）種屬:Annulohypoxylon stygium提供形式:試管斜面
番茄內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)Apx基因PCR試劑盒SCT|Secretin營養(yǎng)瓊脂(NA)三層無菌包裝即用平板PRODUCTNAME：NUTRIENTAGARPLATES【產(chǎn)品用途】營養(yǎng)瓊脂(NA)三層無菌包裝即用平板用于空間環(huán)境中浮游菌及沉降菌等微生物的測定以及實(shí)驗(yàn)室相關(guān)微生物指標(biāo)的測定。

G14 Gastrin 6|G17 Gastrin 14|G34 Gastrin|G52 Big gastrin|G6|GAS|GAST|gastrin|Gastrin 17|Gastrin 34|Gastrin component I Gastrin 52|Gastrin component II|Gastrin component III營養(yǎng)瓊脂(NA)接觸皿PRODUCTNAME：NUTRIENTAGARCONTACTPLATES【產(chǎn)品用途】營養(yǎng)瓊脂(NA)接觸皿用于設(shè)備、車間、人員、包裝材料等表面微生物的測定。

BMP-7(Bone Morphogenetic Protein 7)||BMP7|OP1|Osteogenic Protein-1R2A瓊脂培養(yǎng)基（三層無菌包裝）成品培養(yǎng)基PRODUCTNAME：R2AAgar【R2A瓊脂培養(yǎng)基產(chǎn)品用途】R2A瓊脂培養(yǎng)基用于水中細(xì)菌總數(shù)的測定。

Angiotensin IIBaird-Parker瓊脂平板用途：Baird-Parker瓊脂平板用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)。（美國FDA、ISO、EP、USP）。規(guī)格：20個/盒。儲存條件：2-8℃，避光保存

ADH|VP|AVP血平板用途：血平板用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的培養(yǎng)及溶血試驗(yàn)。（GB、ISO）。規(guī)格：20個/盒。儲存條件：2℃-8℃，避光保存

Activin binding protein|follistatin|FS|FST麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板用途：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板用于分離發(fā)酵乳糖和非發(fā)酵乳糖的革蘭氏陰性腸道桿菌。（GB）規(guī)格：20個/盒。儲存條件：2-8℃，避光保存

MPO(Myeloperoxidase)孟加拉紅瓊脂平板（虎紅瓊脂平板）用途：孟加拉紅瓊脂平板（虎紅瓊脂平板）供霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)、分離培養(yǎng)用。規(guī)格：20個/盒。儲存條件：2℃-8℃，避光保存

MMP-13(Matrix Metalloproteinase 13)|MMP-13|CLG3|MANDP1|Collagenase 3SS瓊脂培養(yǎng)基平板用途：SS瓊脂培養(yǎng)基平板用于沙門氏菌、志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)。（GB）。規(guī)格：20個/盒。儲存條件：2℃-8℃，避光保存