參數(shù)規(guī)格：

產品名稱：玉米內標準hmg-A基因探針法PCR試劑盒
貨號:CP96933
產品規(guī)格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。

以下是玉米內標準hmg-A基因探針法PCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Human FCGRT(IgG receptor FcRn large subunit p51) ELISA Kit資源名稱馬勃狀硬皮馬勃種屬:Scleroderma│areolatum Ehrenb.分離基物:子實體

Human SULF1(Extracellular sulfatase Sulf-1) ELISA Kit資源名稱扇形小孔菌種屬:Microporus│affinis (Blume & T. Nees) Kuntze分離基物:土坡上

Human PRKCA(Protein kinase C alpha type) ELISA Kit資源名稱亞粘團串珠鐮孢種屬:Fusarium│subglutinans (Wollenw. & Reinking) P.E. Nelson To分離基物:玉米

Human TIGIT(T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains) ELISA Kit資源名稱土生寬鐮孢霉種屬:Fusarium│tumidum var. humi Reinking分離基物:華石斛根部

Human ELOVL1(Elongation of very long chain fatty acids protein 1) ELISA Kit資源名稱松口蘑（斜面）種屬:Tricholoma matsutake (S. Ito & S. Imai) Singer提供形式:斜面

Human RYR2(Ryanodine receptor 2) ELISA Kit資源名稱福毛鬼傘（斜面）種屬:Coprinellus radians (Desm.) Vilgalys, Hopple & Jacq. Johnson分離基物:采集地：河南

Human TJP1(Tight junction protein ZO-1) ELISA Kit資源名稱禾谷鐮孢菌（斜面）種屬:Gibberella zeae (Schwein.) Petch提供形式:斜面

Human Anti-LAMP2(Anti-lysosomal Associated Membrane Protein 2 Antibody)ELISA Kit資源名稱雞縱菌種屬:Macrolepiota│albuminosa (Berk.) Pegler分離基物:子實體

Human ADA(Adenosine deaminase) ELISA Kit資源名稱巴西蘑菇種屬:Agaricus│blazei Murrill分離基物:子實體

Human DBT(Lipoamide acyltransferase component of branched-chain alpha-keto acid dehydrogenase complex, mitochondrial) ELISA Kit資源名稱茶樹菇種屬:Agrocybe│cylindracea (DC.) Gillet分離基物:子實體

Human TMBIM6(Bax inhibitor 1) ELISA Kit資源名稱紅芝種屬:Ganoderma│lucidum (Curtis) P. Karst.分離基物:子實體

Human DAO(D-amino-acid oxidase) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌阿馬金亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. amagiensis提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CXADR(Coxsackievirus and adenovirus receptor) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌安達樓亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. andalousiensis提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CSN2(Beta-casein) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌巴西亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. brasiliensis提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human HMGA2(High mobility group protein HMGI-C) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌喀麥隆亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. cameroun提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human AKT2(RAC-beta serine/threonine-protein kinase) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌高麗亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. coreanensis提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human FGFBP1(Fibroblast growth factor-binding protein 1) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌貴陽亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. guiyangiensis提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human CHIT1(Chitotriosidase-1) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌阿萊亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. alesti Heimpel and Angus提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human S100A4(Protein S100-A4) ELISA Kit資源名稱蘇云金芽孢桿菌科爾默亞種種屬:Bacillus│thuringiensis subsp. colmeri Delucca et al.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human MSRA(Mitochondrial peptide methionine sulfoxide reductase) ELISA Kit資源名稱野油菜黃單胞菌核桃致種屬:Xanthomonas│campestris (Pammel 1895) Dowson 1939 emend. Vauter分離基物:葉片
玉米內標準hmg-A基因探針法PCR試劑盒CNTF|HCNTF形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長　特征特性  Z初以為這株細胞的起源是正常羊膜，但隨后通過同工酶分析、HeLa標記染色體和DNA指紋法分析，證實該細胞是HeLa細胞污染的；角蛋白陽性。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

AFGF|FGF1(Acidic Fibroblast Growth Factor 1)|alpha-ECGF|beta-ECGF|FGF-1|HBGF-1|AFGF|aFGF|ECGFB|FGFABeta-endothelial cell growth factor|FGF-alpha|fibroblast growth factor 1(acidic)|HBGF1|HBGF-1形態(tài)特性  成纖維細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  T/G HA-VSMC細胞建系于1992年（Tilberg A F，et al）。該細胞系屬有限細胞系，可因連續(xù)傳代而衰老死亡。連續(xù)傳代試驗顯示，T/G HA-VSMC細胞經歷15-20個群體倍增時間就會衰老死亡，固需控制有限的傳代次數(shù)。 培養(yǎng)條件  F12K  10%FBS；加多種生長因子，詳見參考文獻

IFNA1(Interferon alpha-1|13 )形態(tài)特性  成纖維細胞樣　生長特性 貼壁生長特征特性  HEL是一株人二倍體細胞系，具有典型的成纖維細胞形態(tài)，染色體2n＝46?？捎糜谧鞫喾N病毒的宿主，抗衰老藥物試驗等。  培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

Flt3(FMS Like Tyrosine Kinase 3)|CD135|Flk-2|STK-1|CD135|CD135 antigen|fetal liver kinase 2|FL cytokine receptor|FLK2|FLT-3|FLT3 receptor tyrosine kinase|Fms-like tyrosine kinase 3|fms-related tyrosine kinase 3|growth factor receptor tyrosine kinase type III|Stem cell tyrosine kinase 1形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  L - 02細胞建系鑒定于1980年（葉秀珍等，1980)。該細胞是一株正常肝細胞系，具有典型的肝細胞形態(tài)學特征，可用于多種實驗研究。  培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

LIF(Leukemia Inhibitory Factor)|CDF|D factor|DIA|differentiation inhibitory activity|differentiation stimulating factor|Differentiation-stimulating factor|Emfilermin形態(tài)特性  成纖維細胞樣　生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞系衍生自WI-38細胞。WI-38細胞感染低滴度的SV40病毒，經過連續(xù)傳代、克隆選擇獲得多株亞系，其中2RA亞系含有SV40 neo (T)和轉移抗原，從而改變其有限細胞系的特性，可在常規(guī)條件下連續(xù)傳代。該細胞系的實驗操作甚少在生物安全P2級條件下進行。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

PDGFA(Platelet Derived Growth Factor Subunit A )|PDGF-A形態(tài)特性  成纖維細胞樣　生長特性 貼壁生長特征特性  HL是一株由人胚胎肺組織分離鑒定的有限細胞系，傳代25代，可支撐多種人源病毒的復制，廣泛用于病毒學基礎研究。該細胞由湖北醫(yī)學院病毒所張春芳女士提交保藏。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　

Kit ligand|Mast cell growth factor|MGF|Stem cell factor|SCF|c-Kit ligand|Soluble KIT ligand|sKITLG|KITLG|MGF|SCF形態(tài)特性  上皮細胞樣生長特性 貼壁生長　特征特性  該細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞，通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2，Psi-2細胞產生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317，Z后將PA317產生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS　

TIE1(Tyrosine-protein kinase receptor Tie-1)|receptor tyrosine kinase|soluble TIE1 variant 1|soluble TIE1 variant 2|soluble TIE1 variant 5|TIEsoluble TIE1 variant 4|tyrosine kinase with immunoglobulin and epidermal growth factor homologydomains 1|tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 1形態(tài)特性  內皮細胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細胞可用于血管內皮修復損傷的研究。 培養(yǎng)條件  F12K  10%FBS