實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)gos9基因PCR試劑盒
貨號:CP96895
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對照。

以下是水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)gos9基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human CGA(Chromogranin A) ELISA Kit資源名稱酸土脂環(huán)芽孢桿菌種屬:Alicyclobacillusacidoterrestris安全等級:1

Human FTH1(Ferritin heavy chain) ELISA Kit資源名稱馬紅球菌種屬:Rhodococcus equi分離基物:Lung abscess of foal

Human FTL(Ferritin light chain) ELISA Kit資源名稱巧克力微桿菌種屬:Microbacterumchocolatum安全等級:1

Human RORC(Nuclear receptor ROR-gamma) ELISA Kit資源名稱粘質(zhì)沙雷氏菌粘質(zhì)亞種種屬:Serratiamarcescens安全等級:1

Human CNTF(Ciliary neurotrophic factor) ELISA Kit資源名稱紅串紅球菌種屬:Rhodococcuserythropolis分離基物:Internationalwaters,PacificOcean

Human FGF1(Heparin-binding growth factor 1) ELISA Kit資源名稱乳酸乳球菌乳酸亞種種屬:Lactococcus lactis subsp. lactis提供形式:凍干物

Human IFNA1(Interferon alpha-1/13) ELISA Kit資源名稱腸膜明串珠葡萄聚糖亞種種屬:Leuconostocmesenteroidessubsp.cremoris安全等級:1

Human FLT3(Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3) ELISA Kit資源名稱青枯假單胞菌種屬:Pseudomonas solanacearum (Smith)Smith提供形式:凍干粉

Human LIF(Leukemia inhibitory factor) ELISA Kit資源名稱食神鞘氨醇桿菌種屬:Sphingobacteriumspiritivorum安全等級:1

Human PDGFA(Platelet-derived growth factor subunit A) ELISA Kit資源名稱生孢梭菌種屬:Clostridium sporogenes提供形式:凍干粉

Human KITLG(Kit ligand) ELISA Kit資源名稱發(fā)根根瘤菌種屬:Agrobacterium│rhizogenes (Riker et al.) Young et al.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human TIE1(Tyrosine-protein kinase receptor Tie-1) ELISA Kit資源名稱粉紅單端孢霉種屬:Trichothecium roseum (Pers.) Link分離基物:蘋果果實(shí)

Human TNFRSF1A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A) ELISA Kit資源名稱皺褶青霉種屬:Penicillium│rugulosum分離基物:土壤

Human TNFRSF1B(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B) ELISA Kit資源名稱里氏木霉種屬:Trichoderma reesei提供形式:凍干管，斜面培養(yǎng)物

Human GRN(Granulins) ELISA Kit資源名稱梨形毛霉種屬:Mucor│piriformis分離基物:豬糞

Human TNFSF10(Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand) ELISA Kit資源名稱粉紅寄生菌種屬:Hypomycesrosellus安全等級:1

Human AMH(Muellerian-inhibiting factor) ELISA Kit資源名稱短密青霉種屬:Penicillium│brevicompactum分離基物:沉積物/上覆水

Human APOC1(Apolipoprotein C-I) ELISA Kit資源名稱米黑根毛霉種屬:Rhizomucormiehei安全等級:1

Human APOH(Beta-2-glycoprotein 1) ELISA Kit資源名稱隱甲藻種屬:Crypthecodiniumcohnii分離基物:Macrocystissp.,PacificGrove,CA,1977

Human AKT1(RAC-alpha serine/threonine-protein kinase) ELISA Kit資源名稱浮游球衣菌種屬:Sphaerotilusnatans分離基物:paper-millslime
水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)gos9基因PCR試劑盒L-Lactate Dehydrogenase0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基用途：0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查及消毒技術(shù)規(guī)范。(《中華人民共和國藥典》2010年版)原理：

FSH(Follicle-Stimulating Hormone)無菌試驗(yàn)用真菌培養(yǎng)基【貨號、名稱、規(guī)格、產(chǎn)品形態(tài)及包裝形式】貨號規(guī)格名稱產(chǎn)品形態(tài)021044250g無菌試驗(yàn)用真菌培養(yǎng)基脫水干粉【無菌試驗(yàn)用真菌培養(yǎng)基用途】

LH(Luteinizing Hormone)|Lutropin|Lutrophin需氧、厭氧菌瓊脂培養(yǎng)基(FT)產(chǎn)品規(guī)格：250g

ALB|albumin|GIG42|HSA|PRO0883|PRO0903|PRO1341|PRO1708|PRO2044|PRO2619|PRO2675|Serum albumin|UNQ696|PRO1341胰蛋白胨生理鹽水溶液(TPS)產(chǎn)品規(guī)格：250g

SOD1嗜熱脂肪桿菌恢復(fù)瓊脂培養(yǎng)基產(chǎn)品規(guī)格：250g

IL6|BSF2|HGF|HSF|IFNB2|CDF營養(yǎng)肉湯產(chǎn)品規(guī)格：250g

IL-10|IL10|IL10A|CSIF|TGIF明膠培養(yǎng)基(營養(yǎng)明膠)用途：明膠培養(yǎng)基供測定細(xì)菌液化明膠使用(GB15979-2002和GB/T4789.28-2003中3.10，GB/T4789.35-2003)。原理：

TNFα(Tumor Necrosis Factor Alpha)|TNF-α|DIF|TNF-alpha|TNFA|TNFSF2伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)用途：伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基(EMB)用于分離革蘭氏陰性腸道菌特別是大腸菌群和糞大腸菌群(GB/T4789.38-2008，GB15979-2002，SN0169-92，化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007版和GB5750.12-2006)。原理：