參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系番茄1345-4探針法qPCR試劑盒
貨號:CP96990
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

以下是轉(zhuǎn)基因品系番茄1345-4探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human PLTP(Phospholipid Transfer Protein) ELISA Kit資源名稱胡蘿卜軟腐病堅固桿菌種屬:Pectobacterium carotovorum提供形式:凍干物

Human PLVAP(Plasmalemma Vesicle Associated Protein) ELISA Kit資源名稱伯頓畢赤酵母（斜面）種屬:Pichia burtonii提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human pTAU(phosphorylated microtubule-associated protein tau) ELISA Kit資源名稱中間硫桿菌種屬:Thiobacillus│intermedius分離基物:生物除臭塔

Human pNF-H(Phosphorylated Neurofilament H) ELISA Kit資源名稱草分枝桿菌種屬:Mycobacterium│phlei提供形式:凍干物

Human PP(Pepsin) ELISA Kit資源名稱茄科羅爾斯通氏菌種屬:Ralstonia│solanacearum提供形式:凍干物

Human PP13(Placental Protein13) ELISA Kit資源名稱加氏乳桿菌種屬:Lactobacillus gasseri提供形式:凍干物

Human PPAR-α(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Alpha) ELISA Kit資源名稱唾液乳桿菌種屬:Lactobacillus salivarius提供形式:凍干物

Human PPAR-γ(Peroxisome ProlifeRator Activated Receptor Gamma) ELISA Kit資源名稱多形擬桿菌種屬:Bacteroides thetaiotaomicron分離基物:人臉

Human PPOX(Protoporphyrinogen Oxidase) ELISA Kit資源名稱格利菲斯瓦爾德鎮(zhèn)磁螺菌種屬:Magnetospirillum│gryphiswaldense分離基物:river sediment

Human PPP1R1A(Protein Phosphatase 1 Regulatory Subunit A) ELISA Kit資源名稱魯氏少根根霉種屬:Rhizopus arrhizus var. rouxii分離基物:酒曲

Human PRB1(Basic Salivary Proline Rich Protein 1) ELISA Kit資源名稱產(chǎn)黑普雷沃氏菌種屬:Prevotella│melaninogenica分離基物:唾液

Human PRB2(Basic Salivary Proline Rich Protein 2) ELISA Kit資源名稱中華石花菌種屬:Mycogelidium│sinense分離基物:子實(shí)體組織

Human PRCP(Prolylcarboxypeptidase) ELISA Kit資源名稱紅色毛癬菌種屬:Trichophyton rubrum安全等級:1

Human PRELP(Proline Arginine Rich End Leucine Rich Repeat Protein) ELISA Kit資源名稱乳酸桿菌種屬:Lactobacillus│分離基物:健康孕婦道分泌物

Human Preptin(Preptin) ELISA Kit資源名稱假堅強(qiáng)芽孢桿菌（暫無）種屬:Bacillus pseudofirmus提供形式:凍干物/斜面

Human PRKG1(Protein Kinase, cGMP Dependent Type I) ELISA Kit資源名稱戴氏菌種屬:Dyella│sp.分離基物:土壤

Human Pro-ADM(Proadrenomedullin) ELISA Kit資源名稱百日咳鮑特菌種屬:Bordetella pertussis提供形式:凍干粉

Human ProGRP(Pro-Gastrin Releasing Peptide) ELISA Kit資源名稱致病性大腸埃希菌種屬:Escherichia│coli提供形式:凍干物

Human pro-IL1β(pro interleukin 1 beta) ELISA Kit資源名稱熱纖梭菌種屬:Clostridium thermocellum提供形式:凍干物

Human Pro-MMP-1(pro-Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit資源名稱云芝栓孔菌（斜面）種屬:Trametes versicolor提供形式:斜面培養(yǎng)物
轉(zhuǎn)基因品系番茄1345-4探針法qPCR試劑盒WNT5A|hWNT5A(Protein Wnt-5a)|wingless-type MMTV integration site family|member 5A|WNT-5A protein形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

PTPRQ(Phosphotidylinositol phosphatase PTPRQ)|PTP-RQ|R-PTP-Q|Receptor-type tyrosine-protein phosphatase Q形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  該細(xì)胞屬藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

RALB|Ras related protein Ral B形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣生長特性 懸浮生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

VIM(Vimentin)形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣　生長特性 懸浮生長特征特性  該細(xì)胞屬利保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

Multidrug resistance-associated protein 4|ATP-binding cassette sub-family C member 4|MRP/cMOAT-related ABC transporter|Multi-specific organic anion transporter B|MOAT-B|ABCC4|MRP4形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣　生長特性 懸浮生長特征特性  該細(xì)胞屬藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

GTP binding protein smg p21B|K REV|RAL1B|RAP1B|Ras related protein Rap 1b形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS

Multidrug resistance-associated protein 6|ATP-binding cassette sub-family C member 6|Anthracycline resistance-associated protein|Multi-specific organic anion transporter E|MOAT-E|ABCC6|ARA|MRP6形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS

Multidrug resistance-associated protein 9|ATP-binding cassette sub-family C member 12|ABCC12|MRP9形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長、懸浮生長均有特征特性  該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS