參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉基因品系棉花3006-210-23 PCR試劑盒
貨號:CP97066
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。

以下是轉基因品系棉花3006-210-23 PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：

同工酶: 染色體: 使用權限: A類

件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS 支原體檢測: 陰性 STR: 同工酶: 染色體: 使用權限: A類

人前列腺癌細胞；22Rv1 形態(tài)特性: 上皮細胞 生長特性: 貼壁生長 特征特性: 22RV1是來自異種移植(在閹割引起前列腺癌衰退又在其父親的雄性激素信賴型CWR22嫁接后復發(fā)的小鼠中連續(xù)傳代)的人前列腺癌上皮細胞系。此細胞系表達前列腺特異抗原。二羥基脂酮輕微刺激細胞生長，經(jīng)westernblot檢測溶解產(chǎn)物與抗雄性激素受體抗體起免疫反應。EGF刺激細胞生長，但TGFβ-1不能抑制細胞生長。該細胞在裸鼠中成瘤。 培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10% 傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。 傳代情況: PN5 凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS 支原體檢測: 陰性 STR: 同工酶: 染色體: 使用權限: A類

急性髓系細胞白血病細胞；KG-1 形態(tài)特性: 原粒細胞 生長特性: 懸浮生長 特征特性: KG1細胞系由H.P.Koeffler和D.W.Golde建立。骨髓抽自一個59歲的患有紅白血病而后又發(fā)展成急性骨髓原性白血病的男性白人。KG1細胞在形態(tài)上類似急性髓原白血病，表現(xiàn)為明顯的多形化，骨髓母細胞和骨髓細胞占優(yōu)勢。少量細胞是成熟的粒細胞，也有微量的巨噬細胞和嗜曙紅細胞。 培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS 傳代方法: 1:3傳代,2-3天傳一代 傳代情況: PN 凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS 支原體檢測: 陰性 STR: 同工酶: 

轉基因品系棉花3006-210-23 PCR試劑盒ROR2形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 半貼壁生長特征特性  該雜交瘤細胞由湖南遠泰生物技術有限公司制備并提交，細胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎研究和臨床檢驗。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

LELP1(Late cornified envelope-like proline-rich protein 1)|Novel small proline-rich protein形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 半貼壁生長特征特性  該雜交瘤細胞由湖南遠泰生物技術有限公司制備并提交，細胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎研究和臨床檢驗。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

Ripk3|RIP3|Receptor-interacting protein 3|receptor-interacting serine-threonine kinase 3|RIP-3|RIP3receptor interacting protein 3|RIP-like protein kinase 3形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 半貼壁生長特征特性  該雜交瘤細胞由湖南遠泰生物技術有限公司制備并提交，細胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎研究和臨床檢驗。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

5-LO(Arachidonate 5-Lipoxygenase)|ALOX5|5LPG|LOG5|LOX5A|5-lipoxygenase|5-LOX|arachidonic 5-lipoxygenase alpha-10 isoform|arachidonic 5-lipoxygenase delta-10-13 isoform|arachidonic 5-lipoxygenase delta-13 isoform|arachidonic acid 5-lipoxygenase|leukotriene A4 synthase形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 半貼壁生長特征特性  該雜交瘤細胞由湖南遠泰生物技術有限公司制備并提交，細胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎研究和臨床檢驗。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

ITIH4|gp120|PK-120|H4P|IHRP|ITI-HC4|ITIHL1|PK120|heavy chain-like|1|inter-alpha(globulin) inhibitor H4(plasma Kallikrein-sensitive glycoprotein)|inter-alpha-trypsin inhibitor family heavy chain-related protein|inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4|plasma kallikrein-sensitive glycoprotein 120形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 半貼壁生長特征特性  該雜交瘤細胞由湖南遠泰生物技術有限公司制備并提交，細胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎研究和臨床檢驗。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

p53R2|RRM2B形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 半貼壁生長特征特性  該雜交瘤細胞由湖南遠泰生物技術有限公司制備并提交，細胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎研究和臨床檢驗。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

ALOX15B(Arachidonate 15-lipoxygenase B)|15-LOX-B|15-LOX-2|Linoleate 13-lipoxygenase 15-Lob|15-lipoxygenase 2|Arachidonate 15-lipoxygenase type II形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 半貼壁生長特征特性  該雜交瘤細胞由湖南遠泰生物技術有限公司制備并提交，細胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎研究和臨床檢驗。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS　

IREB2|IRE-BP 2|IRP2|Iron regulatory protein 2形態(tài)特性  淋巴母細胞樣生長特性 半貼壁生長特征特性  該雜交瘤細胞由湖南遠泰生物技術有限公司制備并提交，細胞注射小鼠腹腔可產(chǎn)生高滴度的單抗，可用于基礎研究和臨床檢驗。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS