使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系棉花BXN染料法qPCR試劑盒
貨號(hào):CP97073
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
?實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

以下是轉(zhuǎn)基因品系棉花BXN染料法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
anti- ACPP antibody資源名稱葡枝根霉種屬:Rhizopus stolonifer提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:產(chǎn)果膠酶。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0014生長(zhǎng)條件:28℃，好氧，5-7天，產(chǎn)黑色孢子

anti- ACPT antibody資源名稱乳酸乳球菌種屬:Lactococcus lactis提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:生產(chǎn)酸牛奶。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0044生長(zhǎng)條件:30℃

anti- ACRV1 antibody資源名稱產(chǎn)氨短桿菌種屬:Brevibacterium│ammoniagenes提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0502生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法

anti- ACSF2 antibody資源名稱沙雷氏菌屬種屬:Serratia│sp.提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法

anti- ACSL1 antibody資源名稱谷氨酸棒桿菌種屬:Corynebacterium│glutamicum提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:產(chǎn)L-苯丙氨酸。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0002生長(zhǎng)條件:28℃

anti- ACSL3 antibody資源名稱宇佐美曲霉變種種屬:Aspergillus│usamii var.提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0015生長(zhǎng)條件:28-30℃存儲(chǔ)條件:真空冷凍干燥法

anti- ACSL4/FACL4 antibody資源名稱布氏乳桿菌種屬:Lactobacillus│buchneri分離基物:青貯飼料提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:制作青貯飼料。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0006

anti- ACSL5 antibody資源名稱乳桿菌屬種屬:Lactobacillus│sp.分離基物:酸馬奶提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0006生長(zhǎng)條件:37℃

anti- ACSM2A antibody資源名稱鏈球菌屬種屬:Streptococcus│sp.分離基物:稀奶油提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0005生長(zhǎng)條件:37℃

anti- ACSM3 antibody資源名稱格氏乳球菌種屬:Lactococcus│garvieae分離基物:成熟酸奶提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:發(fā)酵酸奶培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0005

anti- ACSM5 antibody資源名稱乳酸乳球菌乳脂亞種種屬:Lactococcus│lactis subsp. cremoris分離基物:開菲爾粒提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:開菲爾發(fā)酵劑培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0005

anti- ACSS1 antibody資源名稱季也蒙假絲酵母種屬:Candida│guilliermondii提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:用于白酒釀造研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0077生長(zhǎng)條件:28℃

anti- ACSS3 antibody資源名稱異常漢遜酵母異常變種種屬:Hansenula│anomala var. anomala提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:用于清香型白酒的釀造研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0077生長(zhǎng)條件:28℃

anti- ACTA1-Specific antibody資源名稱異常威克漢姆酵母種屬:Wickerhamomyces│anomalus提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:用于清香型白酒的釀制研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0077生長(zhǎng)條件:28℃

anti- ACTA2/smooth muscle actin antibody資源名稱死亡谷芽孢桿菌種屬:Bacillus│vallismortis分離基物:潤(rùn)元參提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:用于微生態(tài)治療劑研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0033

anti- ACTA2/smooth muscle actin antibody資源名稱梭狀芽孢桿菌種屬:Bacillus│fusiformis分離基物:輕馬勃提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:用于食品腐菌的研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0033

anti- ACTL6A antibody資源名稱解淀粉芽孢桿菌植物亞種種屬:Bacillus│amyloliquefaciens subsp. plantarum分離基物:灌中香辣黑豆提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:用于聚谷氨酸研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0347

anti- ACTL7A antibody資源名稱酒香酵母屬種屬:Brettanomyces│sp.提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:用于白酒生香。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:CM0013生長(zhǎng)條件:28～30℃
轉(zhuǎn)基因品系棉花BXN染料法qPCR試劑盒小鼠Helicobacter pylori antibody(IgG)Bovine IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit18.75pg/ml31.25-2000pg/ml

小鼠 IHH Bovine KISS(Kisspeptin) ELISA Kit18.75 pg/ml31.25-2000pg/ml

小鼠 IDO1 Bovine HSP60(Heat shock protein 60) ELISA Kit0.938ng/ml1.563-100ng/ml

小鼠 Shh-N Bovine HSP70(Heat shock protein 70) ELISA Kit0.188ng/ml0.313-20ng/ml

小鼠 INH-B Bovine HSP90(Heat shock protein 90) ELISA Kit3.75ng/ml6.25-400ng/ml

小鼠 INH-A Bovine IgM(Immunoglobulin M) ELISA Kit0.469ug/ml0.781-50ug/ml

小鼠 OSM Bovine IgA(Immunoglobulin A) ELISA Kit1.875ng/ml3.125-200ng/ml