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行業(yè)產(chǎn)品
當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR試劑盒>>基因PCR試劑盒>> 50T轉(zhuǎn)基因品系玉米DK404SR染料法qPCR試劑盒
大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)lectin基因染料法PCR試劑盒
大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)lectin基因PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)PKABA1基因PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)HvPKABA1基因PCR試劑盒
大麥內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)gamma-hordein基因PCR試劑盒
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:轉(zhuǎn)基因品系玉米DK404SR染料法qPCR試劑盒
貨號(hào):CP97292
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
運(yùn)輸:低溫
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
PCR檢測(cè)方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為:待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
以下是轉(zhuǎn)基因品系玉米DK404SR染料法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品:
anti- GLRX3 antibody資源名稱白色假芽孢桿菌種屬:Falsibacillus│pallidus分離基物:土壤/椰子樹(shù)腐爛芯覆土提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:近海細(xì)菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:33
anti- GLT25D1 antibody資源名稱噬甲基菌(加詞待譯)種屬:Methylophaga│aminisulfidivorans分離基物:水樣/近海岸海水提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:M750
anti- GLT25D2 antibody資源名稱波多野氏微桿菌種屬:Microbacterium│hatanonis分離基物:其他/頭發(fā)定型劑提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:;培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:221
anti- GLTP antibody資源名稱潮汐赤桿菌種屬:Erythrobacter│gaetbuli分離基物:水樣/潮間帶海水sea water of the tidal flat提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:,用于系統(tǒng)分類分析。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471
anti- Glucagon antibody資源名稱淺紫鏈霉菌種屬:Streptomyces│violascens分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:抗菌/抗腫瘤活性研究培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:1003生長(zhǎng)條件:28℃
anti- Glucocorticoid receptor antibody資源名稱短芽胞桿菌種屬:Brevibacillus│sp.分離基物:土壤/油污海沙提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:近海細(xì)菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:33
anti- GLUD1 antibody資源名稱需鹽色鹽桿菌種屬:Chromohalobacter│salexigens分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在石油烴類降解菌/生物活性物質(zhì)篩選培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821
anti- GLUD2 antibody資源名稱亞歷山大海洋柄菌種屬:Oceanicaulis│alexandrii分離基物:水樣/上層海水提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:1.生物降解;2.生物催化;3.生物活性物質(zhì)篩選;4.海洋微生物生態(tài)學(xué)研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821
anti- GLUT1 antibody資源名稱雷夫松氏細(xì)菌種屬:Leifsonia│sp.分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:1.海洋石油污染生物修復(fù); 2.生物活性物質(zhì)篩選培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821
anti- GLUT1 antibody資源名稱南沙食烷菌種屬:Alcanivorax│nanshagensis分離基物:沉積物/深海沉積物提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:有機(jī)污染物降解菌/石油烴類降解菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃
anti- GLUT2 antibody資源名稱海洋交替單胞菌種屬:Alteromonas│marina分離基物:水樣/上層海水提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油污染海域菌群培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471
anti- GLUT2 antibody資源名稱沙班鹽水球形菌種屬:Salinisphaera│shabanensis分離基物:沉積物/土黃色沉積物5-10cm提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:1、海洋石油污染生物修復(fù); 2、生物活性物質(zhì)篩選。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821
anti- GLUT3 antibody資源名稱太平洋生絲單胞菌種屬:Hyphomonas│pacificus分離基物:沉積物/熱液區(qū)沉積物提供形式:凍干物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:1、海洋石油污染生物修復(fù); 2、生物活性物質(zhì)篩選。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長(zhǎng)條件:28℃
anti- GLUT4 antibody資源名稱紅色簡(jiǎn)納西氏菌種屬:Jannaschia│rubra分離基物:水樣/表層海水提供形式:凍干物模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:,用于分類學(xué)研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:25℃
anti- GLUT9 antibody資源名稱硫膨大桿菌種屬:Thioclava│sp.分離基物:沉積物/近海沉積物提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:1001
anti- Glutamate receptor 2 antibody資源名稱假苯基桿菌種屬:Phenylobacterium│falsum分離基物:沉積物/深海沉積物上覆水提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:1.生物降解;2.生物催化;3.生物活性物質(zhì)篩選;4.海洋微生物生態(tài)學(xué)研究。培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:472
anti- Glutamine synthetase antibody資源名稱費(fèi)氏弧菌種屬:Vibrio│fischeri提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:;環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)菌:發(fā)光菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃
anti- GLYAT antibody資源名稱鹽島海源菌種屬:Idiomarina│insulisalsae分離基物:土樣/鹽場(chǎng)土樣提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471
轉(zhuǎn)基因品系玉米DK404SR染料法qPCR試劑盒大鼠 sTRAIL Human MLANA(Melanoma antigen recognized by T-cells 1) ELISA Kit46.875pg/ml78.125-5000pg/ml
大鼠 sPECAM-1 Human SLC7A11(Cystine/glutamate transporter) ELISA Kit0.094ng/ml0.156-10ng/ml
大鼠 SFMC Human ADAD1(Adenosine deaminase domain-containing protein 1) ELISA Kit0.188ng/ml0.312-20ng/ml
大鼠 sEPCR Human SMYD3(SET and MYND domain containing 3) ELISA Kit18.75pg/ml31.25-2000pg/ml
大鼠 SGPVI Human SNAI1(Snail family transcriptional repressor 1)ELISA Kit18.75pg/ml31.25-2000pg/ml
大鼠 sTREM-2 Human CALB1(Calbindin) ELISA Kit3.75pg/ml6.25-400pg/ml
大鼠 sTREM-1 Human IFNAR2(Interferon alpha/beta receptor 2) ELISA Kit0.938ng/ml1.56-100ng/ml
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