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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> NADH氧化酶(NOX)可見分光光度法檢測(cè)試劑
貨號(hào) | GOY-01S6334 |
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選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測(cè)方法 | 可見分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6334 |
商品介紹:
測(cè)定意義
NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)(DCPIP)的還原相偶聯(lián),藍(lán)色的DCPIP被還原為無(wú)色的DCPIP,在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的還原速率計(jì)算出NADH氧化酶活性的大小。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
4-(Boc-)苯酸 97%2-甲基丁硫 95%Anti-phospho-RUNX1(Ser303) 化急性髓白血病1蛋白抗體
鈹標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml2-甲基-2-噻唑啉 97%Anti-Runx3 Runx3抗體
2-溴-3-甲基吡-5-酸 95%4-甲基噻唑 99%Anti-S6PDH 6-山梨脫氫抗體
2-溴吡-5-酸頻哪酯 98%甲基基二硫 97%Anti-S100B S100B蛋白抗體
苯并呋喃-2-酸 98%烯基二硫 95%Anti-S100A1 S100A1抗體
2-氟-5-溴吡-3-酸 98% 2-吡基乙硫 98%Anti-S100A13 S100A13抗體
N-Boc-5-溴-2-酸 95%3-甲基-2-丁硫 98%Anti-SAMDC S-腺苷蛋脫羧抗體
5-基-2-氟苯酸 97%烯基基三硫 50%Anti-S100-A8/MRP8 S100A8抗體
NADH氧化酶(NOX)可見分光光度法檢測(cè)試劑盒碳化鎢 粉末,99.9% metals basis, <10μmPE標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈
碳化鎢 9.8%,3-20nm PE-CY5標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈
三氧化鎢 SPAlexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈
三氧化鎢 99.99% metals basisAlexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈
三氧化鎢 比表面積15m2/g, 50nm,99.9%PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈
三氧化鎢 99.8% metals basisFITC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc
4-溴酰 96%辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈
對(duì)乙酮 97%PE-Cy3標(biāo)記的兔抗猴IgM
芐 AR,99.00%PE-CY5標(biāo)記的兔抗猴IgM
芐 CP,98.5%PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG
二乙二丁醋酯 98%PE-Cy3標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG
二芐 98%PE-CY5標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG
二乙二二乙 98%PE-Cy7標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG
乙二二 standard for GC,≥99.5% (GC)Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗小鼠IgM
乙二二 AR,99.5%(GC)Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗小鼠IgM
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