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NADH氧化酶(NOX)可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑
乳酸脫氫酶(LDH)可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑
貨號(hào) | GOY-01S6326 |
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/24樣 |
檢測(cè)方法 | 可見(jiàn)分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6326 |
商品介紹:
測(cè)定意義
LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測(cè)定原理:
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
化中心粒蛋白Nudel抗體Human P3(Caspase-3) ELISA Kit犬骨橋素elisa檢測(cè)試劑盒多少錢
類固脫氫樣蛋白NSDHL抗體Human CYCS(Cytochrome c) ELISA Kit犬甲狀腺素elisa檢測(cè)試劑盒多少錢
化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體Human APOA1(Apolipoprotein A-I) ELISA Kit犬雌二醇elisa檢測(cè)試劑盒多少錢
化1型神經(jīng)纖維瘤抗體Human NOS1/nNOS(Nitric oxide synthase, brain) ELISA Kit犬組elisa檢測(cè)試劑盒多少錢
化谷受體2B抗體Human APOC1(Apolipoprotein C-I) ELISA Kitα1微球蛋白elisa檢測(cè)試劑盒多少錢
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乳酸脫氫酶(LDH)可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒聚烯酰 非離子型,分子量:200萬(wàn)-1400萬(wàn)Anti-OVA/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體IgG雞τ-蛋白激1(τPK1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
N-鄰 99%Anti-ox-LDL/FITC 熒光素標(biāo)記抗氧化低密度脂蛋白抗體IgG雞膀胱腫瘤抗原(BTA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
蘿卜硫素 90%Anti-OXR /FITC 熒光素標(biāo)記整合素樣金屬蛋白與1型-7抗體IgG雞抗環(huán)胍氨肽抗體(ACCPA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
異龍腦酯 95%Anti-Oxytetracycline/FITC 熒光素標(biāo)記抗體IgG雞α1(Ta1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
亞鈉 80%Anti-P2P-R/RBBP6 /FITC 熒光素標(biāo)記增殖潛能相關(guān)蛋白抗體IgG雞早老素1(PS1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
N,N-二乙-2--1,4- 99%Anti-P2Y1 receptor/FITC 熒光素標(biāo)記P2Y1受體抗體IgG雞垂體腺苷環(huán)化激活肽38(PACAP-38)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
超細(xì)球形銅粉 99.9%,D50(0.2~0.55μm) Anti-P2Y4 receptor/P2ry4 /FITC 熒光素標(biāo)記P2Y4受體抗體IgG雞垂體腺苷環(huán)化激活肽27(PACAP-27)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2,4-二-3,5-二硝三氟 97%Anti-P14ARF/FITC 熒光素標(biāo)記抑癌因p14抗體IgG
2,4,5-三嘧 98%Anti-P16/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗抑癌因p16抗體IgG綿羊抵抗素(RETN)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2-酰酯 98%Anti-P19ARF/FITC 熒光素標(biāo)記p19ARF抑癌因抗體IgG綿羊S100鈣結(jié)合蛋白B (S100B)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
氨乙縮二 97%Anti-P21/WAF1/CIP1 /FITC 熒光素標(biāo)記p21抗體IgG綿羊P選擇素(SELP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
4-乙烯 98% Anti-P27/kip1 /FITC 熒光素標(biāo)記P27抗體/周期素依賴激抑制劑IgG綿羊β內(nèi)啡肽(β-EP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
納米氮化鋁 99.9% metals basis,50nmAnti-P27/kip1/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記P27抗體/周期素依賴激抑制劑IgG綿羊白介素10(IL-10)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
六方氮化 99.9% metals basis,1~2μmAnti-P38 MAPK/FITC 熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激p38抗體IgG綿羊血清淀粉樣蛋白A(SAA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
碳化 1-10 μm,98%Anti-P38 MAPK/RBITC 紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記絲裂原活化蛋白激p38抗體IgG綿羊化腺苷活化蛋白激(AMPK)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
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