當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 乙醛脫氫酶(ALDH)紫外分光光度法
貨號 | GOY-01S6348 |
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操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測方法 | 紫外分光光度法 |
貨號 | GOY-01S6348 |
商品介紹:
測定意義
乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種,廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內(nèi)。主要作用是將乙醛氧化成乙酸,在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動物體內(nèi),線粒體乙醛脫氫酶能把對生物體有害的醇類轉(zhuǎn)化,所以在細胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關(guān)注;同時,乙醛脫氫酶在分子生物學(xué)以及相關(guān)疾病的檢測方面有較廣泛的研究應(yīng)用。
測定原理
在輔酶Ⅰ存在的條件下,乙醛脫氫酶催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH,在340nm處的吸光值會增加,測定340nm處的吸光值變化,可計算得到乙醛脫氫酶的活性。
自備實驗用品及儀器
天平、離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、蒸餾水。
實驗方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
O-甲基-L- 98%菌唑 分析標準品,98.5%Rabbit Anti-human IgA/HRP 辣根過氧化物標記兔抗人IgA
L-蛋甲酯鹽酸鹽 98%除草標準溶液 100μg/ml,u=4%Rabbit Anti-monkey IgG/HRP 辣根過氧化物標記兔抗猴IgG
D-蛋 99%除草標準溶液 10μg/ml,u=5%Rabbit Anti-monkey IgM/HRP 辣根過氧化物標記兔抗猴IgM
1-甲基-L-組 98%滅菌丹標準溶液 100μg/ml,u=2%Rabbit Anti-mouse IgG/HRP 辣根過氧化物標記兔抗小鼠IgG
L-天冬酰甲酯鹽酸鹽 98%滅菌丹標準溶液 10μg/ml,u=6%Rabbit Anti-mouse IgM/HRP 辣根過氧化物標記兔抗小鼠IgM
N'-甲基-L-組甲酯 98%煙嘧磺隆 95%Rabbit Anti-pig IgG/HRP 辣根過氧化物標記兔抗豬IgG
Fmoc-N-甲基-D-亮 97%惡草酮 分析標準品,97.5%Rabbit Anti-pig IgM/HRP 辣根過氧化物標記兔抗豬IgM
N-Boc-D-蛋 98%惡草酮標準溶液100μg/ml,u=2%,溶劑:酮Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根過氧化物標記兔抗大鼠IgG
乙醛脫氫酶(ALDH)紫外分光光度法環(huán)己烯酯 98%Anti-CRHR2/CRFR2 促皮質(zhì)釋放激素受體2抗體人Smad同源物7 (Smad7/MADH7)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
環(huán)己烯酯 ≥98%, FCC, FGAnti-CSIG 衰老抑制因抗體人Sp100核抗原(Sp100)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
楊梅 98%Anti-Cripto-1(NT) 畸胎瘤衍化生長因子抗體(N端)人STAT蛋白抑制因子1(PIAS1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
丁酯 95%Anti-Cripto-1 畸胎瘤衍化生長因子抗體(C端)人STAT蛋白抑制因子3(PIAS3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
龍腦 55%Anti-CSMD1 CSMD1抗體人原鈣黏素β16(PCDHβ16)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
(+)- 分析標準品,≥98% (GC)Anti-CRTAM CRTAM抗體人V型膠原α2(COL5α2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
桂油 FCCAnti-CSP 環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗體人S抗原(SAG)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
小豆蔻油 FCCAnti-C-SKI/v-SKI C-SKI抗體人TH糖蛋白(THP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
香茅 98%Anti-Calcitonin 降鈣素抗體人43KDa Tar DNA結(jié)合蛋白(TDP43)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
香芹酚 99%Anti-Calcitonin 降鈣素抗體人TATA結(jié)合蛋白(TBP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
2-環(huán)戊環(huán)戊酮 97%Anti-CTBP1 C端結(jié)合蛋白1抗體人TATA框結(jié)合蛋白/TBP相關(guān)因子(TAF)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
肉桂 97%Anti-CT DNA (calf thymus DNA) 小牛胸腺DNA 抗體人TATA框結(jié)合蛋白相關(guān)因子1(TAF1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
己 97%Anti-CTGF 結(jié)締組織生長因子抗體人TATA框結(jié)合蛋白相關(guān)因子2(TAF2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
正己 standard for GC, ≥99.0% (GC)Anti-CD150/SLAM 信號淋巴活化分子CD150抗體人TATA框結(jié)合蛋白相關(guān)因子13(TAF13)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
己 ≥97%, FCC, Kosher, FGAnti-CD151/MER2/PETA-3 CD151抗體人微管關(guān)聯(lián)蛋白(MAPτ)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
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