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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>糖酵解系列>> 己糖激酶(HK)微量法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6601 |
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【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6601 |
商品介紹
測(cè)定意義 HK(EC 2.7.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是葡萄糖分解過程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶,催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。 測(cè)定原理 HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰。 需自備的儀器和用品 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
四丁基氫氧化銨 ~40% 水溶液,離子色譜級(jí)2-氯-1,3-二甲基氯化咪唑鎓 90%Anti-CD56/NCAM1 神經(jīng)粘附分子1抗體
2,4,5-三氯 分析標(biāo)準(zhǔn)品氯代二碳鎓六氟鹽 98%Anti-CD171/NCAM-L1 神經(jīng)粘附分子配體1抗體
甲基叔戊基 97%氯代三吡咯烷基鏻六氟鹽 98%Anti-CD172a/SIRP Alpha 信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α抗體
DL-α-酚琥珀酸酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品多肽試劑TCTU 98%Anti-CD57 CD57抗體
基氧鎓四氟酸鹽 96%2-氯-1,3-二甲基咪唑六氟鹽 98%Anti-CD68 CD68抗體
(基硅烷基)重氮 2.0M 己烷溶液3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三-4-酮 98% Anti-CD68 CD68抗體
三(2-乙基) 97%代二乙酯 純度 ≥90%Anti-CD69/CLEC2C/AIM 活化誘導(dǎo)分子CD69抗體
2-硫脲嘧 分析標(biāo)準(zhǔn)品2-(2-吡酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟酸鹽 99%Anti-CD72/Ly-32 CD72蛋白抗體
己糖激酶(HK)微量法檢測(cè)試劑盒二溴 99%大鼠抗抗體(AsAb)免疫試劑盒轉(zhuǎn)錄因子Gli3抗體HSD17B1 羥類固脫氫17β-HSD抗體
溴烷 >99.0%(GC)大鼠抗?fàn)钕偎?T4)抗體(IgG)免疫試劑盒GLIS2蛋白抗體HSD11B2 羥類固脫氫11β2抗體
硫鎳銨,六水 CP,98.0%大鼠抗?fàn)钕偾虻鞍卓贵w(ATGA/TGAB)免疫試劑盒鳥苷環(huán)化激活蛋白1抗體HSD11B1/HSD1 羥類固脫氫11β1抗體
酰 CP大鼠抗?fàn)钕龠^氧化物抗體(TPO-Ab)免疫試劑盒GSK3B相互作用蛋白抗體HRPT2/CDC73/Parafibromin 狀旁腺功能亢進(jìn)蛋白2抗體(分裂周期73)
酰 99%大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)免疫試劑盒高爾體膜相關(guān)蛋白6抗體HRP2 肝癌衍生生長(zhǎng)因子2抗體
酰 99.5%,升華純化大鼠抗環(huán)胍氨肽抗體(Anti-CCP-antibody)免疫試劑盒高爾體自身蛋白GM130抗體Hrk/BCL2 interacting protein BCL2相互作用蛋白質(zhì)抗體
硫聯(lián)氨 CP,98.0%大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)免疫試劑盒糖代謝相關(guān)蛋白1抗體HRH4/GPCR105 組織H4受體抗體
擰蓋機(jī) SG-1550型手持式大鼠抗弓形蟲IgM抗體免疫試劑盒G蛋白偶聯(lián)受體64抗體HRH3/GPCR97 組織H3受體抗體
鋼板鍘刀大鼠抗弓形蟲IgG抗體免疫試劑盒γ氨丁受體相關(guān)蛋白樣1抗體HRH2 組受體H2抗體
移動(dòng)白板架 240*120加厚型單面磁性白板配加厚型雙杠大鼠抗單核抗體(AMA)免疫試劑盒法尼二合1抗體HRH1 組受體H1抗體
(+)-樟腦 99%大鼠抗促狀腺素受體抗體(TRAb)免疫試劑盒核苷結(jié)合蛋白1抗體HRG-alpha/Neuregulin 1 Heregulin α蛋白抗體
雙(4-)酯 99%大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)免疫試劑盒膠質(zhì)纖維性蛋白GFAPδ抗體HRG Beta1 Heregulin β蛋白抗體
1,2,4-三氮唑-3-羧酯 99%大鼠抗IVIgG抗體免疫試劑盒β半糖苷抗體Hrasls3/HREV107 HRAS樣抑制因子3抗體
2,2-雙(羥) 98%大鼠抗IgE受體抗體免疫試劑盒巨軸索蛋白GAN抗體HRASLS2 HRAS樣抑制因子2抗體
2,2-二羥丁 98%大鼠巨噬移動(dòng)抑制因子(MIF)免疫試劑盒G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白O亞A2抗體HRAS+KRAS 轉(zhuǎn)化蛋白p21抗體(原癌因H-ras抗體)
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
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