當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖酵解系列>> 磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI)紫外分光光度法
貨號 | GOY-01S6618 |
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操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測方法 | 紫外分光光度法 |
貨號 | GOY-01S6618 |
商品介紹:
測定意義
磷酸丙糖異構(gòu)酶是重要的糖酵解酶,廣泛存在于動植物及微生物體內(nèi),在機體內(nèi)參與葡萄糖代謝,在糖酵解,糖異生、脂肪酸生物合成及磷酸戊糖代謝中都發(fā)揮著重要作用。
測定原理
磷酸丙糖異構(gòu)酶將磷酸二羥丙酮轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛與NAD在3-磷酸甘油醛脫氫酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH,340nm處的吸光度變化反映了磷酸丙糖異構(gòu)酶的活性的高低。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿。
實驗方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
三異基亞酯 90%4-正基乙炔 98%Anti-VAMP-1/Synaptobrevin-1 VAMP1囊泡相關(guān)膜蛋白1抗體
三異基亞酯 95%4-正戊基苯酸 97%Anti-VAMP-2 囊泡相關(guān)膜蛋白2抗體
硅酸 AR1-溴-4-戊苯 97%Anti-VAMP-3 囊泡相關(guān)膜蛋白3抗體
硅酸 99.9% metals basis4-甲基聯(lián)苯 98%Anti-VAP1 血管粘附蛋白1抗體
薄層層析硅膠板 50×200mm GF254型號 20片/盒4-正戊基聯(lián)苯 99%anti-VASH1 血管抑制蛋白1抗體
薄層層析硅膠 H604-正基環(huán)己酮 99%Anti-VHL/HRCA1 VHL腫瘤抑制因子抗體
薄層層析硅膠 GF254 604-基-4'-戊基聯(lián)苯 98%Anti-VASP 血管擴張激磷蛋白抗體
薄層層析硅膠 HF254 604-基-4'-戊氧基聯(lián)苯 98%Anti-Phospho-VASP (Ser157) 化血管擴張激磷蛋白抗體
磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI)紫外分光光度法檢測試劑盒葒草苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%Anti-EDNR-A/FITC 熒光素標(biāo)記抗內(nèi)皮素受體A抗體IgG大鼠蛋白激Bγ(PKBG)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
千層紙素A 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-EF1a/FITC 熒光素標(biāo)記延伸因子EF-1a抗體IgG大鼠蛋白激B(PKB)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
紫草素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97%Anti-EEF2/FITC 熒光素標(biāo)記真核翻譯延長因子2抗體IgG大鼠蛋白激Cβ1(PKCB1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
毛蕊花糖苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-EEF2k/FITC 熒光素標(biāo)記真核延伸因子激2抗體IgG大鼠蛋白激Cδ(PKCD)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
漢黃芩甙 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-EGF/FITC 熒光素標(biāo)記因子抗體IgG大鼠蛋白激C-ε(PKCe)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
花椒酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-EGF-R/FITC 熒光素標(biāo)記因子受體抗體IgG大鼠蛋白激C-γ(PKCg)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
9-蒽 99%Anti-EGFR/FITC 熒光素標(biāo)記因子受體抗體IgG大鼠蛋白激C-ο(PKCi)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
9-蒽 98%Anti-EGFRvIII/FITC 熒光素標(biāo)記因子受體III型突變體抗體IgG大鼠蛋白激C-θ(PKCq)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
9-蒽 98%Anti-EGFR/PE 熒光素PE標(biāo)記因子受體抗體IgG大鼠蛋白激C-ζ(PKCz)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
二 AR,98%Anti-EGFR /Gold 金標(biāo)記因子受體抗體IgG大鼠蛋白激C(PKC)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
二 GR,99%Anti-Phospho-EGFR(Ser1046/1047) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化因子受體抗體IgG大鼠蛋白激1(PK D1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
9-芴 99% Anti-Phospho-EGFR(Thr669) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化因子受體抗體IgG大鼠蛋白激2(PK D2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
9-芴酮 99%Anti-Egr-1/FITC 熒光素標(biāo)記早期反應(yīng)因-1/應(yīng)急反應(yīng)生長因1抗體IgG大鼠蛋白激抑制劑α(PKIA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
2-(4-羥)乙 98%Anti-eIF2 alpha/FITC 熒光素標(biāo)記真核啟動因子2α抗體IgG大鼠蛋白激抑制劑β(PKIB)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
環(huán)已 CP,98%Anti-eIF4E/FITC 熒光素標(biāo)記真核翻譯起始因子4E抗體IgG大鼠蛋白激抑制劑γ(PKIG)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
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