HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

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描述： TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用加 A 法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，加 A 法的反轉(zhuǎn)錄效率遠(yuǎn)高于莖環(huán)法，因 此，采用該方法可極大的提高檢測(cè)靈敏度（原理見圖 1）。 該試劑盒操作簡(jiǎn)單，僅需要兩步即可輕松完成 miRNA 的 cDNA 合成，合成的 cDNA 可用于所有 miRNA 的后續(xù)定 量檢測(cè)。反轉(zhuǎn)錄完畢后采用特異性的上游引物和接頭引物 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，F(xiàn)AM 標(biāo)記 TaqMan 探針作為熒光報(bào)告基 團(tuán)進(jìn)行定量檢測(cè)（原理見圖 1）。  TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒專用于 miRNAs 分子的反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)，轉(zhuǎn)錄獲得的 cDNA 產(chǎn)物用于 TaqMan 定量 PCR 方法檢測(cè) miRNAs 分子

儲(chǔ)存：請(qǐng)置于-20°C，可保存 2 年；避免反復(fù)凍融
操作方法
1 按以下組分在 0.2 ml EP 管中配制應(yīng)液
miRNA （5～100 ng/μl） 4 μl
5×TaqMan miRNA RT Solution A 1 μl
注意：不建議使用 Total RNA，Total RNA 試驗(yàn)結(jié)果通常差
于 miRNA。
2 在 PCR 儀上按以下條件進(jìn)行加 A 反應(yīng):
 37°C 30min
 85°C 5min
3 反應(yīng)完畢后，在上述 5μl 反應(yīng)體系中加入如下試劑，并
混合均勻。
10×TaqMan miRNA RT Primer 2 μl
10×TaqMan miRNA RT Solution B 2 μl
H2O 11 μl
4 在 PCR 儀上按以下條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng):
 30°C 5min
55°C 60min
 95°C 5min
獲得的 cDNA 產(chǎn)物可用于多個(gè)目標(biāo) miRNA 的檢測(cè)。反轉(zhuǎn)錄完畢后獲得的 miRNA cDNA，可加入 20~80μl ddH20 稀釋2~5 倍，通常取 2μl 即可用于 HG TaqMan miRNA 定量 PCR試劑盒檢測(cè)。

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