【儀表網(wǎng) 行業(yè)標準】近日，由華南農(nóng)業(yè)大學負責起草的《產(chǎn)酸克雷伯桿菌 PCR 檢測方法》和《奇異變形桿菌 PCR檢測方法》編制完成并征求意見，請研究提出修改意見，并填寫《廣東省動物學會團體標準征求意見反饋表》，于2023年4月17日前通過郵件反饋至gdsdongwuxuehui@163.com。
 

　　聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR)是體外酶催化合成特異 DNA片段的方法，模板DNA先經(jīng)高溫變性成為單鏈，在DNA 聚合酶作用和適宜的反應條件下，根據(jù)模板序列設(shè)計的兩條引物分別與模板DNA兩條鏈上相應的一段互補序列發(fā)生退火而相互結(jié)合，接著在 DNA 聚合酶的作用下以四種dNTP為底物，使引物得以延伸，然后不斷重復變性、退火和延伸這一循環(huán)，使欲擴增的基因片段以幾何倍數(shù)擴增。
 

　　《產(chǎn)酸克雷伯桿菌 PCR檢測方法》
 

　　本文件規(guī)定了實驗動物大小鼠產(chǎn)酸克雷伯桿菌的PCR檢測方法。本文件適用于實驗動物大小鼠產(chǎn)酸克雷伯桿菌核酸定性檢測。
 

　　用合適的方法提取樣本中的DNA，分別針對病原菌16s RNA或其他保守的基因設(shè)計特異的引物，通過PCR對模板進行擴增，根據(jù)PCR反應結(jié)果分析該樣品中是否含有某種病原菌。
 

　　儀器設(shè)備
 

　　1PCR儀。
 

　　2電泳儀。
 

　　3凝膠成像分析系統(tǒng)。
 

　　4普通離心機。
 

　　5恒溫孵育器。
 

　　6漩渦振蕩儀。
 

　　7組織勻漿器。
 

　　8生物安全柜。
 

　　9超凈工作臺。
 

　　10冰箱(-20C)。
 

　　11冰箱(-80C)。
 

　　12微量移液器:0.1 uL～2.5uL，1 uL～10 uL，10 uL～100 uL，20 uL～200 uL，100 uL~1000 uL。
 

　　13采樣工具:剪刀、鑷和滅菌棉拭子等。
 

　　《奇異變形桿菌 PCR 檢測方法》
 

　　本文件規(guī)定了實驗動物大小鼠奇異變形桿菌的PCR檢測方法。本文件適用于實驗動物大小鼠奇異變形桿菌核酸定性檢測。
 

　　用合適的方法提取樣本中的DNA，分別針對病原菌16s RNA或其他保守的基因設(shè)計特異的引物，通過PCR對模板進行擴增，根據(jù)PCR反應結(jié)果分析該樣品中是否含有某種病原菌。
 

　　儀器設(shè)備
 

　　1PCR儀。
 

　　2電泳儀。
 

　　3凝膠成像分析系統(tǒng)。
 

　　4普通離心機。
 

　　5恒溫孵育器。
 

　　6漩渦振蕩儀。
 

　　7組織勻漿器。
 

　　8生物安全柜。
 

　　9超凈工作臺。
 

　　10冰箱(-20°C) 。
 

　　11冰箱(-80°C)。
 

　　12微量移液器: 0.1 uL~2.5 uL, l uL~10 uL，10 uL～100 uL,20 uL～200 uL，100 uL~1000 uL。
 

　　13采樣工具:剪刀、鑷和滅菌棉拭子等。