食品和乳品中反式脂肪酸檢測(cè)色譜儀

一、測(cè)定嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸原理

試樣中的脂肪用溶劑提取。提取物在堿性條件下與甲醇反應(yīng)生成脂肪酸甲酯，用配有氫火焰離子化檢測(cè)器的食品和乳品中反式脂肪酸檢測(cè)色譜儀分離順式脂肪酸甲酯和反式脂肪酸甲酯，外標(biāo)法定量。

二、測(cè)定嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸試劑和材料

1. 石油醚：沸程30℃～60℃。

2 .乙mi（C4H10O）。

3 .乙醇（C2H6O）：體積分?jǐn)?shù)為95%。

4 .正己烷（C6H14）：色譜純。

5 .氨水（NH3?H2O）：25%～28%。

6 .氫氧化鉀（KOH）。

7 .甲醇（CH4O）。

8 .：活力單位：1.5U/mg，根據(jù)活力單位大小調(diào)整用量。

9.（Na2SO4）。

10. 氫氧化鉀-甲醇溶液（4mol/L）：稱取26.4 g 氫氧化鉀，溶于約80mL 甲醇中。冷卻至室溫，用甲醇定容至100mL，加入約5g ，充分?jǐn)嚢韬筮^濾，保留濾液。

11. 脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品：十八酸甲酯（C18:0）、反-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9t）、順-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9c）、反-9，12-十八碳二烯酸甲酯（C18:2-9t，12t）、順-9，12-十八碳二烯酸甲（C18:2-9c，12c），放入冰箱在-15℃以下保存。

12. 反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液：濃度分別為10.0mg/ mL。稱取500mg（精確到0.1 mg）反-9-十八碳一烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品和反-9，12-十八碳二烯酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品，分別用正己烷溶解并定容至50.0mL。放入冰箱在-15℃以下保存。

13. 反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液：濃度分別為1.0 mg/ mL。分別吸取兩種反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10.0 mL 入同一100 mL 容量瓶中并用正己烷（4.4）定容。臨用前配制。亦作為標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度。

14.反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液：臨用前配制。分別吸取反式脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液，0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL 于10mL 容量瓶中，用正己烷定容，此濃度即為0、0.2、0.4、0.6、0.8 、1.0mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

15.脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)混合液：將脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品，用正己烷配制成脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，其中每種成分的濃度約為0.05mg/mL 至0.5mg/mL。用于進(jìn)行順反脂肪酸甲酯分離程度及定性的鑒定。

16.剛果紅溶液：稱取1g 剛果紅溶解稀釋至100mL。

三、食品和乳品中反式脂肪酸檢測(cè)色譜儀和設(shè)備

1. GC-6960氣相色譜儀，帶氫火焰離子化檢測(cè)器。

2. 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。

3. 恒溫水?。?0℃～80℃。

4. 渦旋振蕩器。

5. 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000轉(zhuǎn)/分鐘。

6. 毛氏抽脂瓶。

7. 毛氏抽脂瓶搖混器。

8. 脂肪收集瓶：圓底燒瓶，與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀配套。

9. 萬分之一電子天平：感量為0.1mg。

四、測(cè)定嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸分析步驟

1.試樣處理

A. 含淀粉的試樣：稱取混合均勻的固體試樣約1.5g，液體試樣約5g（精確到0.1mg）于毛氏抽脂瓶中，加入約0.1g （酶活力1.5U/mg），混合均勻后，加入8mL～10mL45℃±2℃的水，搖勻。蓋上瓶塞置于55℃±2℃水浴中2 h，每隔10min 搖混一次。加入兩滴約0.1 mol/L 的碘溶液，檢驗(yàn)淀粉是否水解。若無藍(lán)色出現(xiàn)，則水解，否則將毛氏抽脂瓶重新置于水浴中，直至藍(lán)色消失，取出冷卻至室溫。

B. 不含淀粉的試樣：稱取混合均勻的固體試樣約1.5g，液體試樣約10g（精確到0.1 mg）于毛氏抽脂瓶中，加入10mL45℃±2℃的水，將試樣洗入毛氏抽脂瓶的小球中，充分混合，直到試樣散開，冷卻至室溫。

C. 脂肪的提?。合蛎铣橹恐屑尤?.0 mL 氨水，混勻。置于60℃±2℃水浴中15 min～20min，冷卻至室溫。加入10mL乙醇和1滴剛果紅溶液，混勻。再加入25mL乙mi，塞上軟木塞，放到毛氏抽脂瓶）搖混器上震蕩1min，也可采用手動(dòng)振搖方式，再加入25mL石油醚，震蕩1 min，不低于4000轉(zhuǎn)/分鐘離心分層。傾出上清液于脂肪收集瓶中，為次提取。在剩余試樣液中再加入5mL 乙醇，25mL乙mi，25mL石油醚按上述操作步驟進(jìn)行第二次提取。用離心機(jī)離心分層后傾出上清液與次的上清液合并。將脂肪收集瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上，在60℃±2℃通入氮?dú)鈼l件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，保留殘?jiān)?，即為脂肪?/p>

D. 脂肪酸甲酯的制備：將上述脂肪用正己烷溶解并定容至10.0mL，取出3.0mL 于10mL具塞試管中，加入0.3mL 氫氧化鉀-甲醇溶液。蓋緊瓶蓋，渦旋振蕩器上劇烈振搖2 min，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心5min 后將上清液轉(zhuǎn)入氣相色譜試樣瓶中，此為試樣測(cè)定液。

2.測(cè)定

A. 參考色譜條件

色譜柱：PC2560毛細(xì)管柱（100*0.25*0.20）

進(jìn)樣口溫度：250℃；載氣（Ｎ2）

檢測(cè)器溫度：300℃

分流比：10：1

進(jìn)樣量：1.0μL

柱室：初溫120℃,10℃/min升至175℃，保持10min，再以5℃/min升至210℃，保持5min，5℃升至230℃，保持5min

B.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

在儀器工作條件下，對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)工作液分別進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

C.反式脂肪酸甲酯色譜峰的鑒別

對(duì)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)混合溶液進(jìn)樣，進(jìn)行順反脂肪酸甲酯分離程度及定性的鑒定。反十八碳一烯酸甲酯和反十八碳二烯酸甲酯色譜峰