ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。在實驗過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作，必能得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，可提供免費技術(shù)咨詢服務(wù)！
產(chǎn)品名稱 | ADH人乙醇脫氫酶ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human alcohol dehydrogenase, ADH Elisa Kit |
貨號 | FS-H63797 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”，選購優(yōu)勢如下：
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿，細胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標(biāo)齊全：生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
?
樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
（5）培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
Aspergillus phoenicis 海棗曲霉Aspergillus phoenicis凍干物安全等級:1模式菌株:noType strain of A. saitoi綜合PDA：20%馬鈴薯汁1L，葡萄糖20g ，KH2PO4 3g， MgSO4.7H2O 1.5g，硫胺素微量，瓊脂 15g，pH 自然。生長條件:25-28℃，好氧存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度：97%
Cephalosporium│sp. 頭孢霉Cephalosporium│sp.分離基物:冬蟲夏草斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級:1模式菌株:no14生長條件:15℃存儲條件:真空冷凍干燥法；定期移植法 純度：97%
Gluconacetobacr xylinum 木醋桿菌Gluconacetobacr xylinum凍干物安全等級:1Type strain；細菌纖維素醋菌培養(yǎng)基:葡萄糖100.0g ，酵母提取物 10.0 g ，CaCO3 20.0 g ，瓊脂15.0 g ，蒸餾，1.0 L ，pH 6.8生長條件:30℃，好氧存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度：99%
Pediococcus pentosaceus 戊糖片球菌Pediococcus pentosaceus凍干物安全等級:1模式菌株:MRS生長條件:37℃，兼性厭氧存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度：99%
Cystobacr│violaceus 紫色孢囊桿菌Cystobacr│violaceus凍干物安全等級:1模式菌株:no作為粘細菌聚合酶的的基因篩選庫，分析和篩選聚基因的多樣性844生長條件:30℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法 純度：98%
Nannocystis│exedens 侵蝕侏儒囊菌Nannocystis│exedens凍干物安全等級:1模式菌株:no作為粘細菌聚合酶的的基因篩選庫，分析和篩選聚基因的多樣性844生長條件:30℃存儲條件:-80℃冰箱凍結(jié)法 純度：98%
Myxococcus│stipitatus 葉柄粘球菌Myxococcus│stipitatus分離基物:兔糞粒斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no粘細菌分類及菌庫構(gòu)建844生長條件:30℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法 純度：AR,80%
Myxococcus│fulvus 橙色粘球菌Myxococcus│fulvus分離基物:楊樹皮斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no粘細菌分類及藥物篩選847生長條件:30℃存儲條件:液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法 純度：AR,80%
ADH人乙醇脫氫酶ELISA試劑盒實驗原理phospho-STAT1 (Ser727) 磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體α-1抗胰糜蛋白酶抗體4-溴-2,6-二胺Mouse CBX3 (Chromobox Homolog 3) ELISA Kit
STAT2 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體α-1抗胰蛋白酶抗體4-溴-2,6-二胺Mouse CHD3 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 3) ELISA Kit
Phospho-Stat2 (Tyr690) 磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體ATP結(jié)合蛋白家族6抗體Grubbs 2 代催化劑Mouse CHD5 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 5) ELISA Kit
STEAP1 前列腺跨膜上皮1抗原抗體三磷腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體Grubbs 2 代催化劑Mouse CNTF (Ciliary Neurotrophic Factor) ELISA Kit
phospho-STAT3 (Thr705) 磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體脂聯(lián)素受體2抗體Grubbs 2 代催化劑Mouse CROP (Cisplatin Resistance Associated Overexpressed Protein) ELISA Kit
phospho-STAT3 (Ser727) 磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體ANGEL1蛋白抗體L-苯氨芐酯鹽鹽Mouse C-jun ELISA Kit
phospho-STAT5a(Tyr694) 磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5a抗體ANGEL2蛋白抗體L-苯氨芐酯鹽鹽Mouse CC17 (Clara Cell Protein) ELISA Kit
phospho-STAT6(Tyr641) 磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體ANKLE2蛋白抗體L-苯氨芐酯鹽鹽Mouse CD3 (Cluster of differentiation 3) ELISA Kit
操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
