產(chǎn)品介紹:
本試劑盒是目前先進的DNA Ladder抽提試劑盒之一。本試劑盒是針對細胞凋亡過程中產(chǎn)生的核小體間DNA鏈斷裂而設(shè)計的??梢苑浅S行У爻樘嵝∑螢?80-200bp的DNA ladder,同時又可以抽提到大50kb左右的基因組DNA。本試劑盒可以抽提50個樣品。 DNA ladder也稱DNA fragmentation,是細胞凋亡的一個重要指標。通常觀察到DNA ladder,就可以判定細胞發(fā)生了凋亡。 樣品首先被蛋白酶K消化,隨后加入適合DNA結(jié)合到純化柱上的緩沖液,然后加入到純化柱內(nèi)。通過高速離心,使DNA在穿過純化柱的瞬間,結(jié)合到純化柱上,隨后通過兩次洗滌去除各種雜質(zhì),后通過洗脫液把DNA洗脫下來。整個過程無需酚抽提,無需酒精沉淀,樣品裂解后僅需約15分鐘即可完成。 通過DNA純化柱方式抽提DNA ladder比用傳統(tǒng)的酚抽提酒精沉淀方法更加便捷,小片段DNA不容易損失。試劑盒提供了RNase A,可以獲得不含RNA的高純度總DNA,排除了RNA對DNA ladder觀察造成的干擾。 本試劑盒每次多可以抽提20mg組織或200-350萬個培養(yǎng)細胞。樣品用量過多,反而會影響抽提效果。純化柱對于DNA的大容量約為30微克。通常每200萬Hela細胞或500萬淋巴細胞可以抽提得到15-25微克總DNA,每25mg肝、腦、腎組織可以抽提得到10-30微克總DNA,每25毫克心、肺組織可以抽提得到5-10微克總DNA,每10mg脾組織可以抽提得到5-30微克總DNA。樣品的用量請勿超過純化柱的容量,樣品用量好能保持在純化柱容量的70%或以下。當然過少的樣品也不利于檢測到DNA ladder。 對于培養(yǎng)細胞的凋亡檢測,通常6孔板一個孔的細胞就足夠用于DNA ladder的抽提和檢測。 試劑盒組份: 樣品裂解液A——————10ml 樣品裂解液B——————11ml 洗滌液I——————21ml(第一次使用前加入7ml無水乙醇) 洗滌液II——————16ml (第一次使用前加入24ml無水乙醇) 洗脫液——————22ml 蛋白酶K——————1.1ml RNase A——————220μl DNA純化柱及廢液收集管——————50套 儲存條件:室溫,有效期一年。( 蛋白酶K需-20℃保存) |
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 |
DNA Ladder Extraction Kit with Spin Column | 50次 | FS-X9526 |
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
氨酸脫氫酶2(PRODH2)檢測試劑盒 forProlineDehydrogenase2(PRODH2)
鱷失調(diào)蛋白(ATCAY)檢測試劑盒 forCaymanAtaxia(ATCAY)
基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase8(MMP8)
纖維蛋白肽A(FPA)檢測試劑盒 forFibrinopeptideA(FPA)
纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)檢測試劑盒 forFibrinogenLikeProtein1(FGL1)
生長分化因子2(GDF2)檢測試劑盒 forGrowthDifferentiationFactor2(GDF2)
泛醌蛋白4(UBQLN4)檢測試劑盒 forUbiquilin4(UBQLN4)
蛋白激酶Cε(PKCε)檢測試劑盒 forProteinKinaseCEpsilon(PKCe)
矢車菊苷β6(CENTβ6)檢測試劑盒 forCentaurinBeta6(CENTb6)
Calicin蛋白(CCIN)檢測試劑盒 forCalicin(CCIN)
TGFβ誘導早期應(yīng)答基因1(TIEG1)檢測試劑盒 forTGFBetaInducibleEarlyResponseGene1(TIEG1)
組織金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP2)檢測試劑盒 forTissueInhibitorsOfMetalloproteinase2(TIMP2)
白介素31(IL31)檢測試劑盒 forInterleukin31(IL31)
線粒體甘油-3-磷酸?;D(zhuǎn)移酶(GPAM)檢測試劑盒 forGlycerol-3-PhosphateAcyltransferase,Mitochondrial(GPAM)
甘胺酸-N-甲基轉(zhuǎn)移酶(GNMT)檢測試劑盒 forGlycine-N-Methyltransferase(GNMT)
胱天蛋白酶8(P8)檢測試劑盒 forCaspase8(P8)
和肽素(CPP)檢測試劑盒 forCopeptin(CPP)
細胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒(柱式吸附)來酸溴苯那敏標準品 規(guī)格:125mg 英文名稱:Brompheniramine Maleate
S-腺苷-L-高半氨酸標準品 規(guī)格:50mg 英文名稱:S-Adenosyl-L-Homocysteine
托拉唑相關(guān)物質(zhì)C標準品 規(guī)格:20mg 英文名稱:
戊酸雌二醇標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Estradiol Valerate
二硫化四乙基秋蘭姆標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Disulfiram
內(nèi)酯相關(guān)物質(zhì)A標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:
囊素標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Allantoin
芐星頭孢匹林標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Cephapirin Benzathine
蒼白松果菊標準品 規(guī)格:1g 英文名稱:
吡酯標準品 規(guī)格:150mg 英文名稱:Topiramate