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中文名稱：CCCP(50mM) 細胞凋亡誘導劑
英文名稱：
產品規(guī)格：100μl
貨號：FS-X9633
產品介紹:
本品是溶于DMSO的CCCP溶液，濃度為50mM，體積為100μl（相當于1mg的總量），常用作一種陽性對照來誘導細胞凋亡，并配合線粒體膜電位檢測探針JC-1或者JC-10來進行相關研究。 CCCP，即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone，一種質子載體（H+ ionophore），是一種強效的線粒體氧化磷酸化解偶聯劑，促使線粒體內膜對H+產生通透性，導致線粒體內膜兩側的膜電位喪失，誘導凋亡發(fā)生。也可作用于葉綠體膜，抑制光合作用；CCCP還可抑制內質網-高爾基體（ER-Golgi）之間的蛋白轉運，高親和力結合細胞色素氧化酶。 CCCP還具有其他功能： 1）在牛蛙交感神經方面的實驗表明，CCCP 可增強促黃體生成素釋放激素的釋放； 2）作為一種質子導體在葡萄糖存在的情況下影響E.coli 細胞活性； 3）對細胞內鈣水平的各種調節(jié)效應； 4）抑制脂肝酶的分泌； 5）部分抑制pH梯度活化的Cl-攝取以及刷狀緣膜的Cl-/Cl-交換等。 儲存條件：-20℃，有效期12個月 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
細胞外信號調節(jié)激mei2(ERK2)檢測試劑盒 forExtracellularSignalRegulatedKinase2(ERK2)
核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測試劑盒 forReceptorActivatorOfNuclearFactorKappaBLigand(RANkL)
RAD51同源物(RAD51)檢測試劑盒 forRAD51Homolog(RAD51)
組an-N-jia基轉移mei(HNMT)檢測試劑盒 forHistamine-N-Methyltransferase(HNMT)
唾液suan轉移mei7E(SIAT7E)檢測試劑盒 forSialyltransferase7E(SIAT7E)
血小板激活因子乙酰水解mei2(PAFAH2)檢測試劑盒 forPlateletActivatingFactorAcetylhydrolase2(PAFAH2)
巨噬細胞移動抑制因子(MIF)檢測試劑盒 forMacrophageMigrationInhibitoryFactor(MIF)
jia基多巴1α(MEP1α)檢測試劑盒 forMeprinAAlpha(MEP1a)
腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)檢測試劑盒 forTumorNecrosisFactorReceptorSuperfamily,Member1A(TNFRSF1A)
促生長激su釋放激su(GHRH)檢測試劑盒 forGrowthHormoneReleasingHormone(GHRH)
分泌型卷曲相關蛋白5(SFRP5)檢測試劑盒 forSecretedFrizzledRelatedProtein5(SFRP5)
矢車菊δ2(CENTδ2)檢測試劑盒 forCentaurinDelta2(CENTd2)
突觸囊泡蛋白Ⅻ(SYT12)檢測試劑盒 forSynaptotagminXII(SYT12)
Ⅰ型膠原α2(COL1α2)檢測試劑盒 forCollagenTypeIAlpha2(COL1a2)
蛋白二硫鍵異構mei(PDI)檢測試劑盒 forProteinDisulfideIsomerase(PDI)
氨基端前腦鈉su(NT-ProBNP)檢測試劑盒 forN-TerminalProBrainNatriureticPeptide(NT-ProBNP)
ben丙氨suan羥化mei(PAH)檢測試劑盒 forPhenylalanineHydroxylase(PAH)
CCCP(50mM) 細胞凋亡誘導劑jia基多巴標準品 規(guī)格:500mg 英文名稱：Methyldopa
芐星青霉su標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Penicillin G Benzathine
鹽suan賽庚啶標準品 規(guī)格:500mg 英文名稱：Cyproheptadine Hydrochloride
度suan標準品 規(guī)格:400mg 英文名稱：Etodolac
泰諾福韋雜質B標準品 規(guī)格:10mg 英文名稱：
地丹諾辛相關物質B標準品 規(guī)格:25mg 英文名稱：
黃豆黃su標準品 規(guī)格:15mg 英文名稱：Glycitein
乙氧酰anbenjia酯相關物質A標準品 規(guī)格:25mg 英文名稱：Ethopabate Related Compound A
舒芬標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Suprofen
硬脂富馬suan鈉標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Sodium Stearyl Fumarate
