操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X97360 |
商品屬性：
名稱 大鼠雪旺氏細胞 2.組織來源：神經(jīng)組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠雪旺氏細胞分離神經(jīng)組織；周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細胞稱施萬（schwann，又名雪旺細胞）細胞，它沿神經(jīng)元的突起分布。施萬細胞包裹在神經(jīng)纖維上，這種神經(jīng)纖維叫有髓神經(jīng)纖維。有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維的施萬細胞的形態(tài)和功能有所差異，施萬細胞的外表面有基膜，能分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子，促進受損的神經(jīng)元的存活及其軸突的再生，參與周圍神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)纖維的構(gòu)成。施萬細胞的胞核呈長卵圓形，其長軸與軸突平行，核周有少量胞質(zhì)。由于施萬細胞包在軸突的外面，故又稱神經(jīng)膜細胞（neurilemmalcell），它的外面包有一層基膜。施萬細胞最外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱神經(jīng)膜（neurilemma），光鏡下可見此膜。在有髓神經(jīng)纖維發(fā)生中，伴隨軸突一起生長的施萬細胞表面凹陷成一縱溝，軸突位于縱溝內(nèi)，溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜（mesaxon）。軸突系膜不斷伸長并反復包卷軸突，把胞質(zhì)擠至細胞的內(nèi)、外邊緣及兩端（即靠近郎氏結(jié)處），從而形成許多同心圓的螺旋膜板層，即為髓鞘。故髓鞘乃成自施萬細胞的胞膜，屬施萬細胞的一部分。施萬細胞的胞質(zhì)除見于細胞的外、內(nèi)邊緣和兩端外，還見于髓鞘板層內(nèi)的施－蘭切跡。該切跡構(gòu)成螺旋形的胞質(zhì)通道，并與細胞外、內(nèi)邊緣的胞質(zhì)相通。 5.方法簡介： ()實驗室分離的大鼠雪旺氏細胞采用-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： ()實驗室分離的大鼠雪旺氏細胞經(jīng)S-100免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R111 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)雙極、多極形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人抗眼肌抗體(EMAb)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
雞Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒進口、分裝
大鼠嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)免疫試劑盒*直銷
驢雌二醇(E2)免疫試劑盒進口、分裝
李氏菌增菌肉湯（LB1） 英文名稱：Listeria Enrichment Broth Base 產(chǎn)品規(guī)格：9ml*20支/包
葡萄糖胰蛋白胨瓊脂 英文名稱：Glucose Tryptone Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
金胺O染色液 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*6
小鼠硒蛋白M(SELM)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠肺表?
大鼠雪旺氏細胞Eurytrema coelomaticum腔闊盤吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CACH3/CaV1.3 L型鈣通道蛋白a1亞型3抗體 規(guī)格: 0.2ml
Radix glycyrrhizae甘草LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周MALT1 粘膜相關(guān)淋巴組織轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Allpaahuayo virus(ALLV)奧爾帕瓦約病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Cy5 Cy5標記的兔抗人IgG F(ab')2 規(guī)格: 0.1ml
Rhizoma corydalis元胡LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周ABCA7 三磷酸苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml
騾源性成分PCR檢測試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周GIRK1 G蛋白激活內(nèi)向鉀通道1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fructus piperis longi蓽茇染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周gremlin 骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Salmonella abortus ovis羊流產(chǎn)沙門氏LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CLCA4 鈣激活氯離子通道4抗體 規(guī)格: 0.1ml
Porcine herpesvirus豬皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周BST2/CD317 骨髓基質(zhì)干細胞抗原2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Radix ephedrae麻黃根探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周phospho-Rb/p105-Rb(Ser780) 磷酸化成視網(wǎng)膜細胞瘤抑蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fowlpox Virus(FPV)雞痘病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ED-1 外胚層發(fā)育不良抗體 規(guī)格: 0.1ml
