特點(diǎn):
1.即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:對(duì)蝦黃頭病病毒(YHV)核酸定性檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):BJP64846
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
止瀉木子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: H-Pyr-OH產(chǎn)品別名: (R)-(+)-2-芐氧基酸
枳殼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Z-Pyr-OH產(chǎn)品別名: 2,3,5-三氯苯酚
枳實(shí)(酸橙)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DL-m-Tyrosine產(chǎn)品別名: 3-甲基芐
制何首烏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: H-Sar-OMe·HCl產(chǎn)品別名: 4,5-二氯-2-甲基噠-3-酮
腫節(jié)風(fēng)(草珊瑚)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Isoleucinol產(chǎn)品別名: 地氯雷他定
重樓(云南重樓)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Leucinol產(chǎn)品別名: N-甲基環(huán)己
重樓皂苷II(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Boc-Leucinol產(chǎn)品別名: 5-氮雜吲哚-3-甲
重樓皂苷I(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Phenylalaninol產(chǎn)品別名: 1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷四鹽酸鹽
重樓皂苷VII(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Tryptophanol產(chǎn)品別名: 1-溴-4,5-二氯-2-(易)
重樓皂苷VI(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fmoc-Valinol產(chǎn)品別名: 酸鈉一水合物
珠子草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-Valinol產(chǎn)品別名: 2-羥基-5-甲基吡啶
豬膽粉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Phenylglycinol產(chǎn)品別名: 5-溴-6-甲氧基煙酸甲酯
人纖維蛋白原抗體 Peramivir Trihydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
鋅指蛋白798抗體 NXY-059,Cerovive 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶FKBP10抗體 L-Kynurenine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶FKBP11抗體 Sulfadimethoxine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR
FKBP135蛋白抗體 Sulfadimethoxine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
肽基脯氨酸異構(gòu)酶酶FKBP25抗體 Oseltamivir acid 質(zhì)量規(guī)格:>97,BR
肽基脯氨酸異構(gòu)酶酶FKBP8抗體 alpha-Arbutin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
磷酸化叉頭蛋白L2抗體 alpha-Arbutin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
叉頭蛋白N2抗體 Cidofovir dihydrate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)
對(duì)蝦黃頭病病毒(YHV)核酸定性檢測(cè)試劑盒寡單胞菌Anti-CD1A Antibody拉丁屬名: Stenotrophomonas sp.
熱吸水鏈霉菌Anti-CD19 Antibody拉丁屬名: Streptomyces thermohygroscopicus
釀酒酵母Anti-CD1D Antibody拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
長(zhǎng)谷川赤擔(dān)孢酵母Anti-CD2 Antibody拉丁屬名: Erythrobasidium hasegawianum
莫哈韋芽孢桿菌Anti-CD2 Antibody僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
釀酒酵母Anti-Cd2 Antibody拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
嗜熱液化芽孢桿菌Anti-CD22 Antibody拉丁屬名: Bacillus thermoliquefaciens
山崗單胞菌Anti-CD209 Antibody拉丁屬名: Collimonas arenae
薄褐孔菌Anti-CD200 Antibody僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用