參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:甲型流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒恒溫?zé)晒夥?/strong>
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):BJP63210
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
甲胎蛋白AFP抗體
陰離子交換蛋白2抗體
鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體
三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗體
載脂蛋白J抗體
載脂蛋白H抗體
二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶4抗體
AKIRIN2蛋白抗體
ADP核糖基化樣因子8B抗體
三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體
AKIRIN1蛋白抗體
錨定蛋白樣蛋白1抗體
腺苷酸激酶2抗體
頂體前體蛋白抗體
黑色素瘤缺失樣蛋白1抗體
未知糖基化轉(zhuǎn)移酶AER61抗體
鐵蛋白Fe65抗體
抑癌基因ras同源家族1抗體
轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體
心鈉素抗體
丙氨酰tRNA合成酶2抗體
絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體
核突觸蛋白α抗體
自噬相關(guān)蛋白4B抗體
人血吸蟲抗體(IgG)ELISA Kit Human schistosoma haematobium antibody IgG ELISA kit
人血吸蟲(SH)抗體ELISA Kit Human schistosoma haematobium(SH)antibody ELISA kit
人血栓素A2合成酶(TX-A2)ELISA Kit Human Thromboxane-A2 Synthase(TX-A2 Synthase)ELISA Kit
人血栓素A2(TX-A2)ELISA Kit Human Thromboxane A2,TX-A2 ELISA Kit
人血清淀粉樣蛋白P(SAP)ELISA Kit Human SAP ELISA Kit
人血清淀粉樣蛋白A4(SAA4)ELISA Kit Human SAA4 ELISA Kit
人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2(SGK2)ELISA Kit human serum/glucocorticoid regulated kinase 2,SGK2 ISA KIT
人血漿抗凝蛋白S(PS)ELISA Kit Human PS ELISA Kit
人血漿激肽釋放酶(KLKB1)ELISA Kit Human plasma kallikrein,KLKB1 ELISA kit
人血紅蛋白β亞基(HB-β)ELISA Kit Human HB-β ELISA Kit
人血紅蛋白α亞基(HB-α)ELISA Kit Human α-subunits of hemoglobin,HB-α ELISA Kit
人血紅蛋白H(HbH)ELISA Kit Human Hemoglobin H,HbH ELISA Kit
人血紅蛋白C(HbC)ELISA Kit Human Hemoglobin C,HbC ELISA Kit
人血紅蛋白(Hb)ELISA Kit Human Hemoglobin,Hb ELISA Kit
人血管抑素/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)ELISA Kit Human angiostatin,ANG ELISA Kit
人血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13/vWF-cp)ELISA Kit Human ADAMTS-13/vWF-cp ELISA Kit
人血管舒緩激肽(BK)ELISA Kit Human Bradykinin,BK ELISA Kit
人血管生成抑制因子(Arresten)ELISA Kit Human Arresten ELISA Kit
人血管生成素樣蛋白4(ANGPTL4)ELISA Kit Human ANGPTL4 ELISA kit
人血管生成素4(ANG-4)ELISA Kit Human Angiopoietin 4 ELISA Kit
人血管內(nèi)皮抑素抗體(ES-Ab)ELISA Kit Human anti-Endostatin antibody,ES-Ab ELISA Kit
甲型流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒恒溫?zé)晒夥?/strong>人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA Kit Human VCAM-1 ELISA kit
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA Kit Human VEGFR-2/Flk-1 ELISA kit
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子E(VEGF-E)ELISA Kit Human vascular endothelial cell growth factor E,VEGF-E ELISA Kit
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。