茜素紅S法鈣鹽染色試劑盒100ml實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
茜素紅S法鈣鹽染色試劑盒100ml實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
茜素紅S法鈣鹽染色試劑盒100ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
F9(小鼠畸胎瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
CM-H066人腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
REG1B Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1B / PSPS2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
CACO-2細(xì)胞，人結(jié)腸癌細(xì)胞 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞,RPMI-8226細(xì)胞 人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYB
BMP5 Others Human 人 BMP-5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
倉鼠/小鼠雜交瘤細(xì)胞;145-2C11
IL11RA Others Canine 狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
WM451, 人黑色素瘤細(xì)胞
HPB-ALL細(xì)胞，T細(xì)胞白血病細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞高轉(zhuǎn)移亞系,PC-3M 1E8細(xì)胞 人心臟成纖維細(xì)胞總RNAHCF tRNA
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS3;Vero-HCV-NS3
FCGR2 Others Mouse 小鼠 CD32 / FCGR2B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
F3 Others Rat 大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人膀胱癌細(xì)胞;5637(HTB-9)
骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 Adult bone marrow mesenchymal stem cells
A172細(xì)胞，人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 桔青霉 人表皮黑色素細(xì)胞-深色素RNAHEM-d miRNA5 μg
RWPE-2(人前列腺正常細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
HBZY-1(大鼠腎小球系膜細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0369IR983F(大鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1
大鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒 ，英文名： Gzms-A ELISA Kit
人血管生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanangiopoietinreceptorTie1,ANG-R-Tie1ELISAkit 96T/48T
Pig Ficolin-2(FCN2)免疫試劑盒 Pig FCN2 ELISA Kit
CLIAKitforODC(HumanOrnithinedecarboxylase)ELISAKit人*脫羧酶規(guī)格：48T/96T
體外RNA轉(zhuǎn)錄合成試劑盒10次
ELISAKitIFN-β/IFNB人β干擾素規(guī)格：48T/96T
小鼠二酰基甘油(DAG/DG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat endothelial nitric oxide synthase 3 (eNOS-3) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒
Humanthrombinthrombomodulincompound,T-TMELISAKit 人*血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanapoptosisproteaseactivatingfactor-1,Apaf-1ELISA試劑盒人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物葉片活性葉綠體分離試劑盒20次
Humantissueinhibitorsofmetalloproteinase4，TIMP-4ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
茜素紅S法鈣鹽染色試劑盒100ml實(shí)驗(yàn)方法兔子*(cAMP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔子紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔子骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔子睪(T)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
