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Hoechst33342/PI雙染試劑盒100T免費代測

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  • 型號
  • 品牌
  • 所在地上海市
  • 更新時間2017-07-03
  • 廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
  • 所在地區(qū)上海市
  • 實名認證已認證
  • 產(chǎn)品數(shù)量9968
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產(chǎn)品名稱:Hoechst33342/PI雙染試劑盒100T免費代測
儲存條件:A液和B-20℃避光保存。C2-8℃保存。

有效期: 一年。

產(chǎn)品簡介:

Hoechst33342/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒是采用DNA探針雙染細胞核的方法檢測細胞的狀態(tài)。Hoechst33342染色液A可以透過正常細胞膜,而細胞凋亡后,細胞膜對Hoechst33342染色液A的通透性增加,PI染色液B不能透過細胞膜,對正常細胞和凋亡細胞不能染色,而對壞死細胞可以染色。用兩種染色液對細胞進行雙染后,使用流式細胞儀或熒光顯微鏡即可對細胞狀態(tài)進行檢測。在雙變量流式細胞儀的散點圖上,這三群細胞表現(xiàn)分別為:正常細胞為低藍色/低紅色(A+/B+),凋亡細胞為高藍色/低紅色(A++/B+),壞死細胞為低藍色/高紅色(A+/B++)。

Hoechst33342/PI雙染試劑盒100T免費代測使用注意事項
1.微量試劑取用前請 離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
Hoechst33342/PI雙染試劑盒100T免費代測操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應515min
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡;
1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當?shù)牡蛲稣T導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
2)用PBS洗滌細胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
Hoechst33342/PI雙染試劑盒100T免費代測實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細胞;
3)細胞洗滌:用預冷1×PBS4)重懸細胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
5Annexin V-FITC標記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標記:上機前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機前,補加200μL1×Binding Buffer
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