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蘇丹紅ELISA試劑盒操作步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如樣品濃度過(guò)高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋?zhuān)允箻悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍。
酶聯(lián)板使用前用洗液板2-3次,每次浸泡1-2分鐘,250ul/每孔,甩干。
加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00ul,余孔從高到低分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品50ul,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,然后在所有孔中加入50ul蘇丹紅抗體工作液。盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)30分鐘(為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液)。
溫育后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,250nl/每孔,甩干。
所有孔中加入100ul辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗工作液。盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)30分鐘。
溫育后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,250ul/每孔,甩干。
依序每孔加底物溶液90ul, 37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),一般10-15分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的后3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,前3-4孔顏色不明顯,即可終止)。
依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
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蘇丹紅ELISA試劑盒本試劑盒僅供研究使用
檢測(cè)范圍:0.312ng/ml-10ng/ml
zui低檢測(cè)限:0.2ng/ml
特異性:本試劑盒可用于快速檢測(cè)蘇丹紅,與對(duì)們紅有一定交叉反應(yīng)。
有效期:6個(gè)月
預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測(cè)定雞蛋、辣椒、辣椒醬等樣品中的蘇丹紅殘留。
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