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一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次運(yùn)輸詳細(xì)說明書:
一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次運(yùn)輸變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94℃ 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95℃。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次運(yùn)輸DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進(jìn)行推測,一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時(shí)間退火沒有必要。
一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次運(yùn)輸使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Prostaglandin E3 (50 ug) 9-oxo-11。alpha。,15S-dihydroxy-prosta-5Z,13E,17Z-trien-1-oic acid; PGE3; Prostaglandin E3
ERK Inhibitor (1 mg) Extracellular Regulated Kinase Inhibitor; 3-(2-aminoethyl)-5-[(4-ethoxyphenyl)methylene]-2,4-thiazolidinedione, monohydrochloride
維生素B1(鹽酸噻胺)(100GM) Thiamine HCl, 67-03-8; ≥99%
Calpain Inhibitor I (25 mg) N-acetyl-L-leucyl-N-[(1S)-1-formylpentyl]-L-leucinamide; Ac-Leu-Leu-Nle-Aldehyde|ALLN|MG 101; Calpain Inhibitor I
Pimonidazole (50 mg) α-[(2-nitH-imidazol-1-yl)methyl]-1-pipeni7ineethanol; NSC 380540|Ro 03-8799; Pimonidazole
Universal Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail, EZBlock EZBlock Universal Protease and Phosphatase Inhibitor Cocktail
LSD1 Assay DMSO (500 ul) Dimethylsulfoxide|Lysine-Specific Demethylase 1 Assay DMSO; LSD1 Assay DMSO
磷酸化組蛋白H3S10多肽 Phospho Histone Ser10 Peptide (100 ul)
N-octadecanoyl-L-Homoserine lactone (50 mg) N-[(3S)-tetrahydro-2-oxo-3-furanyl]-octadec*; C18-HSL; N-octadecanoyl-L-Homoserine lactone
Ac-DEVD-AMC (5 mg) Caspase-3 Substrate (Fluorogenic)|N-Acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-7-amido-4-Methylcoumarin; N-acetyl-L-α-aspartyl-L-α-glutamyl-L-valyl-N-(4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-7-yl)-L-α-asparagine
MAM2201 N-pentanoic acid metabolite-d5 (500 ug) 5-(3-(4-methyl-1-naphthoyl)-1H-indol-1-yl-2,4,5,6,7-d5)pentanoic acid; JWH 122 N-pentanoic acid metabolite-d5; MAM2201 N-pentanoic acid metabolite-d5
Vitamin D2 (1 g) trimethyl-2-hexen-1-yl]-4H-inden-4-ylidene]ethylidene]-cyclohexanol; Ergocalciferol|Calciferol|Fortodyl|Infron|Mulsiferol|NSC 62792|Radiostol|Uvesterol D; Vitamin D2
Mouse Monoclonal Anti-Rabbit IgG (2500 dtn) Mouse Monoclonal Anti-Rabbit IgG
3-[2-N-(Biotinyl)aminoetxyldithio]propanoic Acid (50 mg) 3-[[2-[[5-[(3aS,4S,6aR)-hexaxy7no-2-oxo-1H-thieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-1-oxopentyl]amino]etxyl]dithio]-propanoic acid
FMOC-Lys(Cy5)-OH FMOC-Lys(Cy5)-OH
Finasteride (100 mg) (4aR,4bS,6aS,7S,9aS,9bS,11aR)-N-(1,1-dimetxyletxyl)-2,4a,4b,5,6,6a,7,8,9,9a,9b,10,11,11a-tetradecaxy7no-4a,6a-dimetxyl-2-oxo-1H-indeno[5,4-f]inoneoline-7-carboxamide; MK 906|Propecia |Proscar ; Finasteride
11(Z),14(Z)-Eicosadienoic Acid (100 mg) 11Z,14Z-eicosadienoic acid; 11(Z),14(Z)-Eicosadienoic Acid
2E- trans-Zeatin
氧化酶試紙片于空腸彎曲菌氧化酶試驗(yàn)
水平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基 Water Plate Count Agar 用于飼料中細(xì)菌總數(shù)測定
抗生素檢定培養(yǎng)基1號(低PH) Antibiotic Agar 250 用于磺芐*效價(jià)測定
DYS耶爾森菌瓊脂250g/瓶用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的分離培養(yǎng)incubationmediaDYS耶爾森菌瓊脂250g/瓶用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的分離培養(yǎng)
0.85%SterileSaline
AntibioticAgarNo.2
擬桿菌選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)(改良GAM瓊脂基礎(chǔ)) 250(g) incubation media 擬桿菌選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)(改良GAM瓊脂基礎(chǔ)) 250(g)
SA瓊脂 Salmonella Arizona Agar 250克 亞利桑那沙門氏菌的選擇性分離
彎曲菌incubationmedia彎曲菌
60g%/LNaClPeptoneWater
一管式雙鏈 cDNA 合成試劑盒10 次運(yùn)輸溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基28073250g用于壓力蒸汽滅菌效果評價(jià)(GB-GB-2002)。
Agar 瓊脂粉 500g incubation media Agar 瓊脂粉 500g
鮮橙曲霉 降低三聚氰胺 支/瓶
NutrientAgar(Agar20g)
Penicillin-sensitivepaper
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