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常用PCR引物100uL保存

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常用PCR引物100uL保存是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

 

常用PCR引物100uL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開(kāi)發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
常用PCR引物100uL保存變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
常用PCR引物100uL保存DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
常用PCR引物100uL保存使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Prostaglandin F2α methyl ester 5 mg     9。alpha。,11。alpha。,15S-trihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid methyl ester; PGF2α methyl ester Prostaglandin F2α methyl ester

Dibutyryl-cGMP sodium salt 50 mg     Dibutyryl Guanosine 3,5-cyclic monophosphate; N-1-oxobutyl-cyclic 3,5-hydrogen phosphate 2-butanoate guanosine, monosodium salt

七水流亞鐵(1KG     Ferrous Sulfate, 7H2O 7782-63-0; 99.5%

Metyrapone 1 g     2-

7Z),11Z-Nonacosadiene 5 mg     7Z,11Z-nonacosadiene; 7Z),11Z-Nonacosadiene

Biotinyl-Ala-Ser-Thr-DL-Asp-Fluoromethylketone Biotinyl-ASTD-Fluoromethylketone     Biotinyl-ASTD-FMK
FFA Assay Enzyme Mixture 1 ea     FFA Assay Enzyme Mixture

*標(biāo)記*基化組蛋白H3K27多肽     Biotinylated Trimethyl Histone H3K27 Peptide 200 ul

Tamoxifen 5 g     2-[4-[1Z-1,2-diphenyl-1-buten-1-yl]phenoxy]-N,N-dimethyl-ethanamine Tamoxifen

4-fluoro-α-Pyrrolidinopentiophenone hydrochloride 10 mg     4-fluoro-α-2-1-pyrrolidinyl-Valerophenone|4-fluoro-α-PVP; 1-4-fluorophenyl-2-1-pyrrolidinyl-1-pentanone, monohydrochloride

Fluorouracil 25 g     5-fluoro-241H,3H-pyrimidinedione NSC 19893|Ro 2-9757|U-8953; Fluorouracil

PtdIns--3,5)-P2 -1,2-dioctanoyl) -sodium salt) (5 mg)     DOPI-3,5-P2|Phosphatidylinositol-3,5-bisphosphate C-8, PtdIns--3,5)-P2 -1,2-dioctanoyl) -sodium salt), 1-(1,2-dioctanoylphosphatidyl)inositol-3,5-bisphosphate, trisodium salt
Cell-Based Assay Calcein AM 1,000X 1 ea     Cell-Based Assay Calcein AM 1000X

R-ketemine xy7nochloride 10 mg     2R-2-2-chloropxenyl-2-metxylamino-cyclohexanone, monoxy7nochloride

Amplite Red HRP底物     Amplite Red HRP Substrate

CAY10581 10 mg     (±)3,4-dixy7no-3-xy7noxy-2,2-dimetxyl-4-[pxenylmetxylamino]-2H-naphtho[2,3-b]pyran-5,10-dione CAY10581

Palmitoyl N-Isopropylamide 100 mg     N-isopropyl-hexadec*; PIA; Palmitoyl N-Isopropylamide

N1-4-chloropxenyl-6-metxyl-N5-[3-9H-purin-6-yl-2-pyridinyl]- 1,5-Isoinoneolinediamine     B-Raf Inhibitor 1
Bufferedglycerol-SodiumChlorideSolution

鹽*增菌液(SC) Selenite Cystine Broth 用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)(GBSN標(biāo)準(zhǔn))

月示胨 Proteose peptone 250 培養(yǎng)基原材料,為營(yíng)養(yǎng)要求高的細(xì)菌生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)

Bolton肉湯基礎(chǔ)250g/瓶用于彎曲菌選擇性增菌,每培養(yǎng)基中添加070ubationmediaBolton肉湯基礎(chǔ)250g/瓶用于彎曲菌選擇性增菌,每培養(yǎng)基中添加0701

BDSMedium
大腸桿菌顯色培養(yǎng)基CRM002l大腸桿菌顯色培養(yǎng)基用于大腸桿菌的快速檢測(cè)和計(jì)數(shù)

L-Trptophan L-* Japan 25g incubation media L-Trptophan L-* Japan 25g

靈芝(紅芝,赤芝) 降低糖蜜廢水 /

鹽胱酸增菌液(SC)20/包用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)

*酶制備培養(yǎng)基
常用PCR引物100uL保存BLAgarMedium

42℃生長(zhǎng)培養(yǎng)基 42growth Medium 用于副溶血性弧菌42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))

無(wú)菌豬血清 Sterile Defidrinated Pig Blood 100毫升 BR

改良GAM瓊脂基礎(chǔ)250g/瓶用于厭氧菌培養(yǎng),每培養(yǎng)基中添加22可選擇性添加222ncubationmedia改良GAM瓊脂基礎(chǔ)250g/瓶用于厭氧菌培養(yǎng),每培養(yǎng)基中添加22可選擇性添加2221

MI培養(yǎng)基 1000ml 用于濾膜法計(jì)數(shù)飲用水中大腸埃希氏菌和大腸菌群

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