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核苷酸類似物法易錯(cuò) PCR 試劑盒15 次運(yùn)輸

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核苷酸類似物法易錯(cuò) PCR 試劑盒15 次運(yùn)輸是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

核苷酸類似物法易錯(cuò) PCR 試劑盒15 次運(yùn)輸使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
核苷酸類似物法易錯(cuò) PCR 試劑盒15 次運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門(mén)為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開(kāi)發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
核苷酸類似物法易錯(cuò) PCR 試劑盒15 次運(yùn)輸DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過(guò)低可造成引物與模板 錯(cuò)配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測(cè),一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時(shí)間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長(zhǎng)時(shí)間退火沒(méi)有必要。
核苷酸類似物法易錯(cuò) PCR 試劑盒15 次運(yùn)輸詳細(xì)說(shuō)明書(shū):

19R-hydroxy Prostaglandin E2 500 ug     9-oxo-11α,15S19R-trihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 19R-hydroxy PGE2|19R-OH PGE2; 19R-hydroxy Prostaglandin E2

Taurodeoxycholic Acid sodium salt 25 g     STDC 2-[[3α,5β,12α)-3,12-dihydroxy-24-oxocholan-24-yl]amino]-ethanesulfonic acid, monosodium salt

無(wú)水*(100GM     Sodium Pyruvate, Sodium Pyruvate

Oxymatrine 100 mg     4R,7aS13aR,13bR,13cS-dodecahydro-4-oxide-1H,5H10H-dipyrido[2,1-f:3’,2’,1-ij][1,6]naphthyridin-10-one Matrine 1-oxide; Oxymatrine

DAF-2 diacetate 500 ug     2-3,6-diacetyloxy-4,5-diamino-9H-xanthen-9-yl-benzoic acid 4,5-Diaminofluorescein diacetate DAF-2 diacetate

3-Ethyldimethylammoniopropane-1-sulfonate     NDSB-195
Resorufin Assay Reagent 500 ul     Resorufin Assay Reagent

鹽酸帕吉林     Pargyline 500 mg

Halopemide 5 mg     N-[2-[4-5-chloro-2,3-dihydro-2-oxo-1H-benzimidazol-1-yl-1-piperidinyl]-ethyl]-4-fluoro-benzamide; NSC 354856|R34301; Halopemide

Cathepsin G Inhibitor I 5 mg     P-

JWH 081 N-5-hydroxypentyl metabolite-d5 1 mg     1-5-hydroxypentyl-1H-indol-3-yl-2,45,67-d5)(4-methoxynaphthalen-1-ylmethanone; JWH 081 N-5-hydroxypentyl metabolite-d5

DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 6-8 kDa     DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 6-8 kDa
Linoleic Acid-d4 25 mg     9Z,12Z-octadecadienoic-910,12,13-d4 acid; Linoleic Acid-d4

Medetomidine xy7nochloride 10 mg     Domitor|MPV 785 5-[1-2,3-dimetxylpxenyletxyl]-1H-imidazole, monoxy7nochloride

iFluor 680 酰進(jìn)     iFluor 680 hydrazide

CMPF-d5 5 mg     2-2-carboxyetxyl-4-metxyl-5-propyl-2,2’,3,33-d5furan-3-carboxylic acid; CMPF-d5

Adrenic Acid 50 mg     7Z10Z,13Z16Z-docosatetraenoic acid; Adrenic Acid

4’,7-Dixy7noxy-5-metxoxy-8-prenylflavanone; Humulol; IXN     Isoxanthohumol
胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基)250g用于藥品抑菌劑效力檢測(cè)中細(xì)菌檢測(cè)

十六烷*基*瓊脂基礎(chǔ) 250(g) incubation media 十六烷*基*瓊脂基礎(chǔ) 250(g)

科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基 1000ml/ 用于霍亂弧菌,副溶血弧菌的分離和初步鑒別

發(fā)酵蛋白胨250incubationmedia發(fā)酵蛋白胨250

TSN瓊脂 250g 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計(jì)數(shù)
*檢定培養(yǎng)基250g*效價(jià)測(cè)定

抗生素檢定培養(yǎng)基7號(hào) 250(g) incubation media 抗生素檢定培養(yǎng)基7號(hào) 250(g)

孟加拉紅培養(yǎng)基(虎紅瓊脂) 250g 供霉菌和酵母的計(jì)數(shù)、分離和培養(yǎng)用

特殊蛋白胨250培養(yǎng)基原材料,提供豐富的營(yíng)養(yǎng)成份incubationmedia特殊蛋白胨250培養(yǎng)基原材料,提供豐富的營(yíng)養(yǎng)成份

胰胨-亞鹽-環(huán)*瓊脂基礎(chǔ) 250g 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計(jì)數(shù)(GB標(biāo)準(zhǔn))
核苷酸類似物法易錯(cuò) PCR 試劑盒15 次運(yùn)輸脫纖維羊血50mlHB025ml脫纖維羊血

Andrade氏糖類肉湯 Andrades Carbohydrate Broth 用于細(xì)菌的糖發(fā)酵試驗(yàn)

MH 肉湯(MHB) Mueller-Hinton Broth 250 用于抗生素敏感試驗(yàn)

蔗糖胰蛋白胨肉湯白糖250g/瓶用于致病性嗜水氣單胞菌的斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)incubationmedia蔗糖胰蛋白胨肉湯白糖250g/瓶用于致病性嗜水氣單胞菌的斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)

改良*麥康凱瓊脂添加劑 1ml*5 每支添加于200ml HB0121-3

核苷酸類似物法易錯(cuò) PCR 試劑盒15 次運(yùn)輸變性溫度與時(shí)間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會(huì)產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會(huì)啟動(dòng)。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會(huì)很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會(huì)影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過(guò) 95。 退火溫度與時(shí)間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強(qiáng),但過(guò)高則引物 不能與模板牢固結(jié)合

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