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dNTP 和引物清除劑100 次運輸

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更新時間:2017-07-17 13:17:34瀏覽次數(shù):172次

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dNTP 和引物清除劑100 次運輸是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。

dNTP 和引物清除劑100 次運輸產(chǎn)品及特點:
易錯 PCRerror-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% ±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCRsequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。
dNTP 和引物清除劑100 次運輸變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達(dá)不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94 20~30 秒,高溫時間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合.
dNTP 和引物清除劑100 次運輸DNA 擴(kuò)增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C%含量進(jìn)行推測,一般實驗中退火溫度比擴(kuò)增引 物的熔解溫度 Tm 5,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時間退火沒有必要。
dNTP 和引物清除劑100 次運輸詳細(xì)說明書:

dNTP 和引物清除劑100 次運輸使用方法:
1. 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL 1 -5 U 補水到 30 uL
2.
按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94 3 分鐘易錯 PCR 94 1 分鐘 45 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
Sulprostone 500 ug     N-methylsulfonyl-9-oxo-11alpha。,15R-dihydroxy-16-phenoxy-17,1819,20-tetranor-prosta-5Z,13E-dien-1-amide; Sulprostone

5-Cyano-2,3-di-p-tolyltetrazolium chloride 100 mg     CTC|Cyanotolyl Tetrazolium Chloride; 5-cyano-2,3-bis4-methylphenyl-2H-tetrazolium, monochloride

二水鉬酸鈉(500GM     Sodium MolybdateVI), Dihydrate, 10102-40-6 MW 241.95; ACS

Meloxicam 500 mg     4-hydroxy-2-methyl-N-5-methyl-2-thiazolyl-1,1-dioxide-2H-1,2-benzothi-3-carboxamide Coxicam|UH-AC 62XX; Meloxicam

DAN-1 EE hydrochloride 5 mg     4-[[3-amino-2-naphthalenylamino]methyl]-benzoic acid ethyl ester, monohydrochloride; DAN-1 EE hydrochloride

4-11,3,3-Tetramethylbutylphenyl-polyethylene glycol, t-Octylphenoxypolyethoxyethanol Polyethylene glycol tert-octylphenyl etxen     Triton X-100, MegaPure Detergent, 10% Solution
Xestospongin C 50 ug     [1R-1R4aR,11R12aS,13S,16aS,23R,24aS]-eicosahydro-5H,17H-1,23:11,13-diethano-2H,14H-[111]dioxacycloeicosino[2,3-b:1213-b1]dipyridine; XeC|Araguspongine E Xestospongin C

Streptavidin:SureLight APC 1 mg     Streptavidin:SureLight APC

PP2 1 mg     3-4-chlorophenyl-1-1,1-dimethylethyl-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine; AGL 1879; PP2

W-15 5 mg     4-chloro-N-[1-2-phenylethyl-2-piperidinylidene]-benzenesulfonamide

JWH 081 N-4-hydroxypentyl metabolite 5 mg     1-4-hydroxypentyl-1H-indol-3-yl)(4-methoxynaphthalen-1-ylmethanone JWH 081 N-4-hydroxypentyl metabolite

DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 12-14 kDa     DiaEasy Dialyzer (3 ml) MWCO 12-14 kDa
ω-3 Arachidonic Acid-d8 1 mg     8Z,11Z,14Z,17Z-eicosatetraenoic-89,1112,14,15,17,18-d8 acid; ω-3 AA-d8; ω-3 Arachidonic Acid-d8

4-Chlorometxcathinone xy7nochloride 5 mg     4-CMC|Clephedrone; 1-

鬼筆環(huán)肽-iFluor 750偶聯(lián)物     Phalloidin-iFluor 750 Conjugate

α-Linolenoyl Ethanolamide-d4 1 mg     N-2-xy7noxyetxyl-1,1’,2,2-d4-octadeca-9Z12Z,15Z-trienamide α-Linolenoyl Ethanolamide-d4

Oleoyl Ethanolamide 50 mg     N-2-xy7noxyetxyl-9Z-octadecenamide; OEA|Oleic Acid Ethanolamide; Oleoyl Ethanolamide

3R,5aS,6R,8aS9R,12S,12aR-Octaxy7no-3,69-trimetxyl-3,12-epoxy-12H-pyrano[4,3-j]-1,2-benzodioxepin-103H-one     Artemisinin
肉湯培養(yǎng)基D250g用于食品中沙門氏菌檢驗前增菌培養(yǎng)

沙門氏菌顯色培養(yǎng)基B 25000 mL/ incubation media 沙門氏菌顯色培養(yǎng)基B 25000 mL/

半固體瓊脂 250g 供細(xì)菌動力觀察、菌種保存等用(GB 4789.4-2010GB/T4789.8-2008)。

RV肉湯RappaportVassiliadisSalmonellaenrichmentbroth用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)。

TPY瓊脂培養(yǎng)基 250g 用于雙岐桿菌分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
MycoplasmaAgarBase

Candida Elective瓊脂 250(g) incubation media Candida Elective瓊脂 250(g)

亮綠乳糖培養(yǎng)液(BGB) 250g 用于多管發(fā)酵法測定飲用礦泉水中大腸菌群的確證試驗(GB/T8538-2008)

梭菌*ClostridiumenrichmentMedium用于梭菌增菌培養(yǎng)

乳糖亞鹽培養(yǎng)基(LS) 250g 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌確認(rèn)試驗
dNTP 和引物清除劑100 次運輸瓊脂培養(yǎng)基N250g于綠膿假單胞菌的分離培養(yǎng)。

Azide dextrose broth 疊氮葡萄糖肉湯 1.01590.0500 MERCK默克 incubation media Azide dextrose broth 疊氮葡萄糖肉湯 1.01590.0500 MERCK默克

金氏B培養(yǎng)基 250g 用于飲用天然礦泉水中銅綠假單胞菌產(chǎn)熒光特性的測定。(GB/T 8538-2008)

尿素卵黃雙糖培養(yǎng)基Urea-EggYolkdoublesugarMedium用于白喉桿菌的鑒別試驗

*鋰鹽 5mg

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