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更新時間:2017-07-17 13:12:04瀏覽次數(shù):101次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)古細菌 + 真細菌種屬鑒定 PCR Mix 3100 次保存
dITP 溶液,100mM0.5mL保存使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應(yīng)體系為例,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理。
dITP 溶液,100mM0.5mL保存產(chǎn)品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化,突變率穩(wěn)定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計位點,則可使產(chǎn)物克隆到表達載體,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產(chǎn)物,對于 1kb 以上的產(chǎn)物,建議分段擴增。
dITP 溶液,100mM0.5mL保存DNA 擴增效率下降;
溫度低產(chǎn)量高,但過低可造成引物與模板 錯配,非特異性產(chǎn)物增加。合適的退火溫度一般在 45~68℃之間。設(shè)置特定反應(yīng)的 適退火溫度,可根據(jù)引物的(G+C)%含量進行推測,一般實驗中退火溫度比擴增引 物的熔解溫度 Tm 低 5℃,退火時間一般為 30~60 秒,足以使引物與模板之間*結(jié) 合,長時間退火沒有必要。
dITP 溶液,100mM0.5mL保存詳細說明書:
15(S)-15-methyl Prostaglandin E2 (1 mg) 9-oxo-11。alpha。,15S-dihydroxy-15-methyl-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 15(S)-15-methyl PGE2; 15(S)-15-methyl Prostaglandin E2
Caspofungin (acetate) (25 mg) L-743,872|MK 0991; 1-[(4R,5S)-5-[(2-aminoethyl)amino]-N2-[(10R,12S)-10,12-dimethyl-1-oxotetradecyl]-4-hydroxy-L-ornithine]-5-[(3R)-3-hydroxy-lornithine]-pneumocandin B0 acetate (1:2)
*(5GM) Rifampicin, 13292-46-1; MW 822.94; ≥97%
nitnacaine (10 mg) 3-(diethylamino)-2,2-dimethylpropyl 4-nitnobenzoate; nitnacaine
FK-409 (50 mg) 4-ethyl-2E-(hydroxyimino)-5-nitno-3E-hexenamide; NOR-3; FK-409
N-(4-Trifluoromethylphenyl)-2-cyano-3-hydroxycrotonamide, 2-Cyano-3-hydroxy-N-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-butenamide A77 1726
PtdIns-(4)-P1 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt) (100 ug) 1-(1,2-dihexadecanoylphosphatidyl)inositol-4-phosphate, diammonium salt; DPPI-4-P1; PtdIns-(4)-P1 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt)
Ac-Calpastatin (184-210) (100 ug) Calpastatin Peptide B27-WT
Cardiogenol C (hydrochloride) (10 mg) 2-[[2-[(4-methoxyphenyl)amino]-4-pyrimidinyl]amino]-ethanol; Cardiogenol C (hydrochloride)
25C-NBOH (hydrochloride) (5 mg) 2;C-C-NBOH; 2-[[[2-(4-chloro-2,5-dimethoxyphenyl)ethyl]amino]methyl]-phenol, monohydrochloride
Ruthenium Red (100 mg) emmonieted Ruthenium Oxychloride|C。I。 7780Ruthenium Red
DiaEasy Dialyzer (15 ml) MWCO 1 kDa DiaEasy Dialyzer (15 ml) MWCO 1 kDa
13(S)-HODE-biotin (100 ug) 13S-xy7noxy-9Z,11E-octadecadiene-(2-biotinyl)hydrazide; 13(S)-HODE-biotin
RHC-80267 (10 mg) U-57908; 1,1’-[O,O’-[1,6-hexanediylbis(iminocarbonyl)]dioxime]
鬼筆環(huán)肽-iFluor 350偶聯(lián)物 Phalloidin-iFluor 350 Conjugate
Butylone-d3 (xy7nochloride) (500 ug) 1-(1,3-benzodioxol-5-yl)-2-(metxyl-d3-amino)-1-butenone, monoxy7nochloride; β-keto MBDB-d3; Butylone-d3 (xy7nochloride)
Oleic Acid (10 g) 9Z-Octadecenoic acid; Oleic Acid
4a- Pseudolaric Acid B
改良frey氏培養(yǎng)基250g用于培養(yǎng)滑液支原體及其他禽支原體用。
三糖鐵瓊脂 根據(jù)葡萄糖、乳糖和蔗糖的發(fā)酵及硫化氫的產(chǎn)生、鑒定革蘭氏陰性菌 500g incubation media 三糖鐵瓊脂 根據(jù)葡萄糖、乳糖和蔗糖的發(fā)酵及硫化氫的產(chǎn)生、鑒定革蘭氏陰性菌 500g
白球擬酵母 支/瓶
LB肉湯300ml/袋*基因工程菌大腸桿菌培養(yǎng)
HCAgar,Modified
曙紅亞甲基藍瓊脂培養(yǎng)基(EMB)250g弱選擇性培養(yǎng)基、用于分離腸道致病菌,特別是大腸桿菌
T1N3肉湯 250(g) incubation media T1N3肉湯 250(g)
*檢定培養(yǎng)基 Nystatin Medium 250克 *效價測定用
酸性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ)250適用于堿性物質(zhì)處理的結(jié)核桿菌標本incubationmedia酸性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ)250適用于堿性物質(zhì)處理的結(jié)核桿菌標本
多粘菌素B(1萬單位) 1萬單位*5支 添加于100mlHB0249或HB0280或HB0248-
dITP 溶液,100mM0.5mL保存ISPMedium
BactoTM Agar incubation media BactoTM Agar
頂頭孢霉 產(chǎn)延胡索酸 支/瓶
BismuthSulfiteAgar
WortAgar
dITP 溶液,100mM0.5mL保存變性溫度與時間:
模板變性溫度是決定 PCR 反應(yīng)中雙鏈 DNA 解鏈的溫度,達不到變 性溫度就不會產(chǎn)生單鏈 DNA 模板,PCR 也就不會啟動。變性溫度低則變性不*, DNA 雙鏈會很快復(fù)性,因而減少產(chǎn)量。變性溫度太高,又會影響酶的活性。一般情況 下可設(shè)為 94℃ 20~30 秒,高溫時間應(yīng)盡量縮短,以保持耐熱 DNA 聚合酶的活力, 高變性溫度不宜超過 95℃。 退火溫度與時間:退火溫度決定 PCR 特異性與產(chǎn)量。溫度高特異性強,但過高則引物 不能與模板牢固結(jié)合
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