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更新時間:2017-07-10 12:33:19瀏覽次數(shù):456次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)細菌蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
細菌蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
細菌蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
IGFBP7 Protein Human 重組人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 (His 標簽)
大鼠腎小球內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
GP140 Others HIV 人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 (group M, subtype CRF07_BC) gp140 人細胞裂解液 (陽性對照)
PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3]雜交瘤細胞CD25 PC 615.3 [PC 61; PC 61.5.3] hybridoma cell line CD25 DMEM+10% Hyclone 滅活血清
食管癌組織源性原代細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)/1ml
HAN(人羊膜細胞) 5×106cells/瓶×2 雪旺細胞培養(yǎng)基SCM
CL-0373KiMA(人胚腎上皮細胞系)5×106cells/瓶×2
CNKSR3 Others Human 人 MAGI1 / CNKSR3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人肝細胞總RNAHH tRNA
大耳山羊皮膚細胞;LDG-3 B淋巴細胞,WEHI 22.1細胞 M5076細胞,小鼠網(wǎng)織細胞肉瘤
人胚肺二倍體細胞;HEL-2
HA Others H11N2 甲型流感 H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
PDK1 Others Human 人 PDK-1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人真皮微血管內(nèi)皮細胞-HDMEC-a
狗腎細胞;Super Tube
CTLL-2細胞,T細胞 人胰腺癌細胞,JF-305細胞 CM-M016小鼠胰腺星狀細胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠骨髓瘤細胞;Y3-Ag 1.2.3
ACVR2B Others Human 人 ACVR2B / ActivinR-IIB 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠可溶性白細胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG2)免疫試劑盒 Human neuregulin-2,NRG2 ELISA kit
MouseHistamine,HISELISAKit小鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
PASE-3蛋白表達西方雜交分析試劑盒5次
Humanmicrotubule-associatedprotein2,MAP-2ELISA試劑盒人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanplaet-associatedComplement3,PAC3ELISAKit人血小板相關(guān)補體3(PAC3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人抑制素A(INH-A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human transthyretin (TTR) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)ELISA試劑盒
HumanIntestinaltrefoilfactor,ITFELISAKit 人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanInterleukin12,IL-12/P40ELISA試劑盒人白介素12(IL-12/P40)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織科薩基病毒A(CoxsackievirusA)定性檢測試劑盒20次
HumanIPO-38ELISAKit人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
細菌蛋白快速提取試劑盒(離心柱法,2D電泳用)50T實驗方法大鼠P53抗體(P53-ab)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠P53(P53)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠P21蛋白(P21)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸(AcSDKP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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