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更新時間:2017-07-10 12:28:53瀏覽次數(shù):327次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當?shù)牡蛲稣T導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
胰島素樣生長因子
大鼠子宮平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL
IL20RB Others Rat 大鼠 IL20RB 人細胞裂解液 (陽性對照)
CHO-K1倉鼠卵巢細胞亞株 CHO-K1 Chinese hamster ovary cell subline F-12K+10%FBS
原代內皮細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml
E.G7-OVA(小鼠T淋巴瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 人卵巢成纖維細胞HOF
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KM9402
CNTN4 Others Human 人 Contactin 4 / CNTN4 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
CM-H054人子宮成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL
MDA-MB-231, 人癌細胞 骨髓瘤,P3-X63-Ag8細胞 SW 1271 [SW-1271; SW1271](人肺腺癌細胞)
小鼠正常肝細胞;NCTC 1469 [NCTC1469]
HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Brisbane/10/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠小腦星形膠質細胞(MA-c)(5×105)
人真皮成纖維細胞-總RNAHDF-a tRNA
中國倉鼠肺細胞;CHL
小鼠肺腺癌低轉移細胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達);LA1-VAP33-GFP 小鼠虹膜色素上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
293T, SV40轉化的人胚腎上皮細胞系 Human
DDR2 Others Mouse 小鼠 DDR2 Kinase / CD167b 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠可溶性血小板內皮細胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經母細胞瘤抗體(NB-Ab)免疫試劑盒 Human anti-neuroblastoma-antibody,NB-Ab ELISA Kit
MousehepatitisBviruscoreantibody,HBcAbELISAKit小鼠乙型肝炎核心抗體(HBcAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
BCL2蛋白表達西方雜交分析試劑盒5次
HumanMetallothionein2,MT2ELISA試劑盒人金屬硫蛋白2(MT2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanplaetactivatingfactor,PAFELISAKit人血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人游離睪酮(F-TESTO)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat histone H2b (histon-H2b) ELISA Kit 大鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒
Humanorosomucoid,ORMELISAKit 人類粘蛋白(ORM)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumaninterferonRegulatoryFactor,IRFELISA試劑盒人干擾素調節(jié)因子(IRF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織結構型內皮細胞一氧化氮合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性熒光定量檢測試劑盒20次
HumanKallikrein6,KLK6ELISAKit人*6(KLK6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實驗方法大鼠白介素1受體拮抗劑(IL-1Ra)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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