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更新時間:2017-07-10 12:20:29瀏覽次數(shù):141次
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磷酸化蛋白裂解100ml實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
磷酸化蛋白裂解100ml實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
FGF12 Protein Canine 重組狗 FGF12 蛋白
大鼠小腸血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
HA Others H10N9 甲型流感 H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)
Raji人Burkitt's淋巴瘤細胞 Raji human Burkitt's lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
人腎小球內(nèi)皮細胞HRGEC
AML-193(人急性單核細胞白血病單核細胞) 5×106cells/瓶×2 人神經(jīng)細胞HN
輸尿管上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CREB3L1 Others Human 人 CREB3L1 / OASIS (aa 396-519) 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠氣管上皮細胞;RTE
PG49細胞,人肺腺癌細胞系 轉(zhuǎn)S9基因倉鼠卵巢細胞,ZA1細胞 CL-0042BxPC-3(人原位胰腺腺癌細胞)5×106cells/瓶×2
SVEC4-10(小鼠淋巴結內(nèi)皮細胞) 5×106cells/瓶×2
HDLEC-c adult 人類皮膚淋巴管內(nèi)皮細胞(HDLEC)來自成年捐獻者 500,000cells 頜下腺上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
IL17RB Others Human 人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 人細胞裂解液 (陽性對照)
人羊膜細胞;WISH
CL-0343HA(人羊膜細胞)5×106cells/瓶×2
P3-NS-1/1-Ag4.1細胞,骨髓瘤細胞 人T細胞白血病細胞,6T-CEM細胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KM9402
幼蚊細胞;C6/36
SELE Others Human 人 E-Selectin / CD62E 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠磷酸化基末端蛋白激酶(P-JNK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人神經(jīng)細胞粘附分子配體1(NCAM-L1/CD171)免疫試劑盒 Human NCAM-L1 ELISA Kit
MouseHeatShockProtein40,Hsp-40ELISAKit小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組蛋白H3-K9甲基化西方雜交分析試劑盒5次
Humanmelanomametastasissurfaceadhesionmolecule,MMSAMELISA試劑盒人黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanplasmaanticoagulantproteinC,PCELISAKit人血漿抗凝蛋白C(PC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人載脂蛋白B1(apo-B1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat major histocompatibility complex class I (MHC I /AgB I /H-1 I) ELISA Kit 大鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ)ELISA試劑盒
Humanpigmentepithelium-derivedfactor,PEDFELISAKit 人色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
humanInsulinreceptorsubstrate2,IRS-2ELISA試劑盒人胰島素受體底物2(IRS-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)活性比色法定量檢測試劑盒20次
HumanLegionellaantibodyIgG,LPAb-IgGELISAKit人軍團菌抗體IgG(LPAb-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
磷酸化蛋白裂解100ml實驗方法大鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠蛋白激酶C(PKC)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠蛋白激酶A(PKA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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