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更新時間:2017-07-10 10:25:35瀏覽次數(shù):219次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒100T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒100T實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
EFNB2 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 標(biāo)簽)
人腦成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CD83 Others Rat 大鼠 CD83 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
3T3-E1細(xì)胞,鼠胚成骨細(xì)胞 U937(組織細(xì)胞淋巴瘤) 山羊皮膚細(xì)胞;WGS1
人表皮黑色素細(xì)胞-中色素裂解物HELM-m L
CW-2(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 表皮角化細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CM-R097大鼠皮下脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
CTLA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CTLA4 / CD152 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
小鼠顆粒細(xì)胞MGC
UI-1細(xì)胞,人前列腺癌細(xì)胞 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞,IEC-6細(xì)胞 人氣管平滑肌細(xì)胞HTSMC
HOS(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
22RV1(人前列腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H043人肝實質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL 人骨骼肌成肌細(xì)胞RNAHSkMM miRNA5 μg
CD3D & CD3E Others Mouse 小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人小細(xì)胞肺癌;NCI-H2227
COC1 人卵巢癌細(xì)胞
AsPC-1人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞 AsPC-1 human metastatic pancreatic adenocarcinoma cells 1640+10% Hyclone滅活血清
TNFSF11 Protein Human 重組人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
人心房成纖維細(xì)胞 (HCFaa)( 5×105 ) hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細(xì)胞 Human
小鼠花生四烯酸-5-脂加氧酶(ALOX5)ELISA試劑盒 ,英文名: ALOX5 ELISA Kit
人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA檢測試劑盒HumanOrexinB,OX-BELISAKit 96T/48T
大鼠維生素C(VC)免疫試劑盒 Rat Vitamin C,VC ELISA Kit
英文名稱RatMotilinELISAKit大鼠胃動素(MTL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
赫特法病毒DNA純化試劑盒10/20次
ELISAKitPC人血漿抗凝蛋白C規(guī)格:48T/96T
人壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1(TRAIL-R1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human apolipoprotein H (Apo-H) ELISA Kit 人載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒
Humanmyelinbasicproteinautoantibody,MBPELISAKit 人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
humanHistamine,HISELISA試劑盒人組胺(HIS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織還原型*(GSH)濃度熒光定量檢測試劑盒50次
HumanL-phenylalanine,LPAELISAKit人苯*(LPA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
胞漿蛋白/核蛋白/組蛋白提取試劑盒100T實驗方法大鼠硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠流行性出血熱抗體(EHF-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PIAb-IgG/IgM)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠磷脂酶A2(PLA-2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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