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更新時間:2017-07-10 10:23:41瀏覽次數(shù):200次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)固定細(xì)胞蛋白提取試劑盒100T使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
固定細(xì)胞蛋白提取試劑盒100T使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
EFNA4 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白 (His 標(biāo)簽)
人腦膜細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
NRG1 Others Human 人 NRG1-beta 1 (ECD) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
MC53細(xì)胞,小鼠腎系膜細(xì)胞 RD(惡性胚胎橫紋肌瘤) 貓腎細(xì)胞;F81
人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞裂解物HIBEpiCL
BGC-803(人胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠支持細(xì)胞;15P-1
人肺間充質(zhì)干細(xì)胞裂解物HPMSCL
CTRL Others Human 人 CTRL-1 / CTRL / Chymotrypsin-like protease 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
615小鼠癌瘤株;Ca759
L-02細(xì)胞,正常人肝細(xì)胞 人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株,7WML6.0細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein cDNA
LLC(小鼠肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
Promocell C-77110 Mitsuhashi/Maramorosh InsectMedium昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基 500ml
FLRT1 Others Human 人 FLRT1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞HA-c
L6 大鼠成肌細(xì)胞
CM-H051人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
SK-N-SH, 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
人成骨肉瘤細(xì)胞;Saos-2 人脈絡(luò)膜微血管細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
大鼠內(nèi)皮抑素(ES)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人*免疫試劑盒 Human Retinoic Acid ELISA Kit
MouseFollistatin,FSELISAKit小鼠卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Ratβ-Thromboglobulin,β-TGELISA試劑盒大鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanmammaliantargetofrapamyein,mTORELISA試劑盒人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人相關(guān)抗原(TAA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human estrogen / progesterone (PROG) ELISA Kit 人孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒
humanlungcancerMarkerELISAKit 人肺癌標(biāo)志物ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanHighdensitylipoproteincholesterol,HDL-CELISA試劑盒人高密度脂蛋白*(HDL-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織過氧化物酶(peroxidase)活性比色法定量檢測試劑盒20次
HumanLuteinizingHormone-ReleasingHormone,LHRHELISAKit人黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
固定細(xì)胞蛋白提取試劑盒100T使用說明書大鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶2(UGT2)ELISA試劑盒 96T/48T 96T/48T 組裝/原裝
大鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1(UGT1)ELISA試劑盒 96T/48T 96T/48T 組裝/原裝
大鼠尿蛋白(UP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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